RNase R

RNase R (Ribonuclease R)是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种来源于大肠杆菌的Mg²⁺依赖的3'→5'核糖核酸外切酶。RNase R能消化线性RNA (Linear RNA)，但不能消化环状RNA (Circular RNA, circRNA)、套索RNA (Lariat RNA)、3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA以及具有复杂二级结构的tRNA、5S RNA等[1, 2]。

RNase R常用于消化除去线性RNA，以获得环状RNA (也称环形RNA)、内含子套索(Intron lariat)等非线性RNA。RNase R为环状RNA的研究提供了极大的便利，也可以给研究RNA剪接(RNA splicing)带来很大的便利。套索RNA是在pre-mRNA的剪接内含子过程中产生的，经RNase R消化，可以从总RNA中被分离出来而用于后续研究。

碧云天生产的RNase R不能消化环状RNA但可以消化线性RNA的效果请参考图1。

图1. 碧云天生产的R7092 RNase R可以消化线性RNA但不会消化环状RNA的效果图。在20µl反应体系中含20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM MgCl₂和100mM KCl，以长度为22nt的等摩尔数(4pmol，约0.03μg)的线性或环状RNA作为底物，并加入图中ZHI定量的本产品或国外L公司(Competitor)的RNase R。37℃孵育30min，70℃孵育10min终止反应。随后加入4μl 6X DNA Loading Buffer (D0071)，95℃变性5min，然后取出15μl进行7M Urea 15%聚丙烯酰胺凝胶电泳(室温条件下用0.5X TBE作为电泳液，180V电泳90min，NA-Red溶液(1000:1) (D0128/D0130)室温染色10min，拍照观察结果)。如图所示，本产品与国外L公司的产品相比，具有类似的消化效果。图中效果仅供参考，在不同实验条件下获得的效果可能会有所不同，图中效果仅供参考。

用途：环状RNA研究，环状RNA中去除线性RNA，可变剪接研究，内含子套索序列的分析和鉴定等。

来源：由大肠杆菌表达，表达基因为E.coli RNase R基因。

活性定义：One unit converts 1μg of poly-r(A) into acid-soluble nucleotides in 10 minutes at 37℃ in 20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM KCl and 0.1mM MgCl₂。

纯度：不含DNase，不含其它RNA内切酶和外切酶活性。

酶储存溶液：50mM Tris-HCl (pH7.5 @25℃), 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100。

10XReaction Buffer：200mM Tris-HCl (pH8.0 @25℃), 1M KCl, 1mM MgCl₂.

失活或抑制：70℃加热10分钟可使RNase R失活。