用途
该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中天然Ang1-7浓度。
检测原理
本试剂盒采用竞争ELISA法。用人Ang1-7抗原包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人Ang1-7与包被的人Ang1-7竞争生物素标记的抗人Ang1-7单抗上的结合位点,游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人Ang1-7浓度与OD450值之间呈反比,通过绘制标准曲线计算出样品中人Ang1-7的浓度。
反应类型 | 竞争法 |
规格 | 96T |
反应时间 | 2.0h |
反应性 | 人 |
检测方法 | Colormetric |
检测范围 | 15.63-1000 pg/mL |
灵敏度 | 9.38 pg/mL |
样本体积 | 50μL |
样本类型 | 血清、血浆或其他相关生物液体 |
特异性
可检测样本中的人Ang1-7,且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
典型数据
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | O.D | Average |
---|
1000 | 0.356 0.388 | 0.372 |
500 | 0.444 0.502 | 0.473 |
250 | 0.671 0.645 | 0.658 |
125 | 0.95 0.972 | 0.961 |
62.5 | 1.389 1.363 | 1.376 |
31.25 | 1.833 1.809 | 1.821 |
15.63 | 2.186 2.196 | 2.191 |
0 | 2.725 2.735 | 2.73 |
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean (pg/mL) | 46.10 | 155.10 | 482.30 | 46.20 | 149.20 | 518.80 |
Standard deviation | 2.50 | 9.30 | 23.60 | 2.40 | 6.10 | 22.30 |
C V (%) | 5.42 | 6.00 | 4.89 | 5.19 | 4.09 | 4.30 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
---|
Serum (n=8) | 92-103 | 97 |
EDTA plasma (n=8) | 94-104 | 99 |
Cell culture media (n=8) | 88-100 | 95 |
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
| | Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
---|
1:2 | Range (%) | 84-97 | 85-95 | 95-111 |
Average (%) | 91 | 90 | 103 |
1:4 | Range (%) | 85-96 | 90-106 | 98-115 |
Average (%) | 90 | 97 | 105 |
1:8 | Range (%) | 87-100 | 87-102 | 99-113 |
Average (%) | 92 | 94 | 106 |
1:16 | Range (%) | 89-103 | 89-104 | 99-110 |
Average (%) | 96 | 96 | 104 |
注意事项:
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存
2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果
3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样
4、请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定计算时请最后乘以总稀释倍数(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准
8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理
9、.本试剂不同批号组分不得混用。
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