用途
该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组Aβ1-42浓度
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人Aβ1-42抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人Aβ1-42会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人Aβ1-42抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人Aβ1-42抗体与结合在包被抗体上的人Aβ1-42结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,Aβ1-42浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中Aβ1-42的浓度。
反应类型 | 夹心法 |
规格 | 96T |
反应时间 | 3.5h |
反应性 | Human |
检测方法 | Colormetric |
检测范围 | 15.63—1000 pg/mL |
灵敏度 | 9.38 pg/mL |
样本体积 | 100μL |
样本类型 | 血清,血浆或其他生物体液 |
特异性
可检测样本中的人Aβ1-42,且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
典型数据
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
---|
1000 | 2.521 2.537 | 2.529 | 2.437 |
500 | 1.586 1.612 | 1.599 | 1.507 |
250 | 1.006 1 | 1.003 | 0.911 |
125 | 0.431 0.471 | 0.451 | 0.359 |
62.5 | 0.288 0.264 | 0.276 | 0.184 |
31.25 | 0.201 0.185 | 0.193 | 0.101 |
15.63 | 0.134 0.154 | 0.144 | 0.052 |
0 | 0.089 0.095 | 0.092 | -- |
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean (pg/mL) | 49.20 | 91.80 | 423.30 | 46.70 | 85.70 | 451.40 |
Standard deviation | 2.80 | 4.80 | 21.20 | 2.90 | 4.40 | 14.90 |
C V (%) | 5.69 | 5.23 | 5.01 | 6.21 | 5.13 | 3.30 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
---|
Serum (n=8) | 88-102 | 93 |
EDTA plasma (n=8) | 90-103 | 95 |
Cell culture media (n=8) | 85-99 | 91 |
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
---|
1:2 | Range (%) | 89-101 | 94-110 | 86-98 |
Average (%) | 95 | 100 | 91 |
1:4 | Range (%) | 98-118 | 87-99 | 95-107 |
Average (%) | 107 | 93 | 100 |
1:8 | Range (%) | 95-109 | 87-101 | 94-104 |
Average (%) | 101 | 94 | 99 |
1:16 | Range (%) | 94-108 | 85-101 | 98-114 |
Average (%) | 100 | 92 | 104 |
注意事项:
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存
2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果
3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样
4、请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定计算时请最后乘以总稀释倍数(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准
8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理
9、.本试剂不同批号组分不得混用。
艾普蒂生物 品牌保障:
1、质量保证: 产品质量稳定,每批次产品必须通过QA、QC检测才可出库;
2、技术支持: 技术部5x8小时技术问题及时解答
3、服务周到: 发货及时,三个工作日顺丰快递
4、售后无忧:产品质量问题包退包换
艾普蒂ELISA试剂盒的优势:
1、高效、灵敏、特异的抗体;
2、稳定的重复性和可靠性;
3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型!