用途
该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组DKK1浓度
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人DKK1抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人DKK1会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人DKK1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人DKK1抗体与结合在包被抗体上的人DKK1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,DKK1浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中DKK1的浓度。
反应类型 | 夹心法 |
规格 | 96T |
反应时间 | 3.5h |
反应性 | Human |
检测方法 | Colormetric |
检测范围 | 31.25—2000 pg/mL |
灵敏度 | 18.75 pg/mL |
样本体积 | 100μL |
样本类型 | 血清,血浆或其他生物体液 |
特异性
可检测样本中的人DKK1,且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
典型数据
由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
(pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
---|
2000 | 2.408 2.444 | 2.426 | 2.359 |
1000 | 1.529 1.575 | 1.552 | 1.485 |
500 | 0.963 0.939 | 0.952 | 0.885 |
250 | 0.425 0.443 | 0.434 | 0.367 |
125 | 0.284 0.27 | 0.277 | 0.21 |
62.5 | 0.174 0.16 | 0.167 | 0.1 |
31.25 | 0.112 0.126 | 0.119 | 0.052 |
0 | 0.067 0.067 | 0.067 | -- |
精密度
板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。
板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean (pg/mL) | 106.70 | 259.70 | 766.50 | 107.28 | 279.39 | 742.61 |
Standard deviation | 6.53 | 12.21 | 33.88 | 5.73 | 12.13 | 39.66 |
C V (%) | 6.12 | 4.70 | 4.42 | 5.34 | 4.34 | 5.34 |
回收率
分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
---|
Serum (n=8) | 88-99 | 93 |
EDTA plasma (n=8) | 89-104 | 95 |
Cell culture media (n=8) | 89-100 | 95 |
线性
分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
---|
1:2 | Range (%) | 96-112 | 90-106 | 90-104 |
Average (%) | 103 | 98 | 97 |
1:4 | Range (%) | 86-99 | 81-94 | 85-98 |
Average (%) | 93 | 88 | 90 |
1:8 | Range (%) | 89-101 | 84-98 | 82-97 |
Average (%) | 96 | 91 | 89 |
1:16 | Range (%) | 92-104 | 86-99 | 87-99 |
Average (%) | 98 | 92 | 93 |
注意事项:
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存
2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果
3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样
4、请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定计算时请最后乘以总稀释倍数(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准
8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理
9、.本试剂不同批号组分不得混用。
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