伊文思蓝染色液

产品名称 : 伊文思蓝染色液（0.5%）

产品说明：

伊文斯兰(Evans Blue)又称偶氮蓝。伊文斯兰与台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞因有外排功能而无法被伊文斯兰染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。

操作说明：（仅供参考）

(一)血脑屏障通透性

1、 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射 Evans Blue Stain (0.5%)，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取目的脑组织。

2、 脑组织置于 1.5ml 离心管中，加入 1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆, 离心。

3、 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育 24h。

4、 离心 15min。

5、 取上述溶液，用分光光度计测 620 nm 处吸光值(OD 值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的 OD 值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测样品的伊文斯兰含量。

(二)活细胞染色

1、取 100μl 重悬细胞到常规离心管内，入 100μl Evans Blue Stain 轻轻混匀染色(染色时间可适当延长，但不宜超过 10min)。

2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数 500 个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下：细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%

注意事项：

1、 Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性，请小心防护。

2、 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。

3、 血脑屏障通透性实验中，Evans Blue Stain 注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。

4、 采用低温冷冻离心机进行离心。

5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。