RIPA裂解液

名称：RIPA裂解液(强) 

规格：100ml

存储：冰袋运输，-20℃保存，一年有效。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。

注意：如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用 （PMSF现用现加）。

产品描述 

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和ELISA等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用PHYGENE的BCA蛋白浓度测定试剂盒(PH0326)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明 

(一) 贴壁培养细胞：

1、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀， 加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。

2、 去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、 NS 或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

3、 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例， 加入RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解 15～30min，通常裂解液作用于细胞 1～3 秒内，细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。

4、 充分裂解后，10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

5、 进行后续的 SDS-PAGE、 Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。