游离脂肪酸水溶液、游离脂肪酸钠水溶液、游离脂肪酸溶液诱导高脂HepG2脂肪肝细胞损伤模型

游离脂肪酸水溶液、游离脂肪酸钠水溶液包括棕榈酸钠水溶液和油酸钠水溶液。

现有文献中，技术人员多采用100-1600 μM范围内不同浓度的棕榈酸钠（Sodium palmitate）处理HepG2细胞，维持24或48小时，可见棕榈酸钠浓度依赖性地降低HepG2细胞活力（图1B），据此计算出棕榈酸钠的半抑制浓度IC50=490μM。然后作者采用0.25×IC50、0.50×IC50或0.75×IC50的棕榈酸钠处理HepG2细胞，发现0.25×IC50棕榈酸钠对HepG2细胞活力无显著影响（图1C），从而挑选出0.25×IC50（即122.5μM）棕榈酸钠，联合2倍浓度（245μM）的油酸钠，用于下一步研究。

图1. 棕榈酸钠、油酸钠+棕榈酸钠（HF）降低HepG2细胞活力。A. 不同浓度BDE-209对HepG2细胞活力的影响；B. 不同浓度棕榈酸钠对HepG2细胞活力的影响；C. BDE-209、油酸钠+棕榈酸钠（HF）、联合HF和BDE-209（HF-209）对HepG2细胞活力的影响。

此外，也有技术人员采用油酸钠+棕榈酸钠（245μM+122.5μM，简称HF）处理HepG2细胞，结果显示该组合可以增加HepG2细胞中脂滴形成和甘油三酯（TG）含量（图2），增加活性氧簇（ROS）和丙二醛（MDA）含量（图3），并减少线粒体数量，增加线粒体损伤（图4）。证明低浓度油酸钠+棕榈酸钠2:1组合处理2天可以成功构建脂肪肝细胞模型，并导致肝细胞氧化应激和线粒体损伤。

图2. 油酸钠+棕榈酸钠（HF）诱导HepG2脂质堆积。A. HepG2细胞经HF（油酸钠+棕榈酸钠=245+122.5μM）处理48小时后的油红O染色照片。B. HepG2细胞内甘油三酯（TG）含量测定。

图3. 油酸钠+棕榈酸钠（HF）诱导HepG2氧化应激。A. HepG2细胞经HF（油酸钠+棕榈酸钠=245+122.5μM）处理48小时后的DCFH-DA染色照片（A-a）和活性氧簇水平（ROS，A-b）。B. HepG2细胞内丙二醛（MDA）含量测定。

图4. 油酸钠+棕榈酸钠（HF）诱导HepG2线粒体损伤。A. HepG2细胞经HF（油酸钠+棕榈酸钠=245+122.5μM）处理48小时后的MitoTracker染色照片（A-a）和线粒体数量（A-b）。B. JC-1染色照片（B-a）和红色/绿色荧光比值（B-b）。

基于上述实例，在体外研究中，技术人员为了模拟高甘油三酯和游离脂肪酸所致的脂毒性，通常需要添加高浓度的硬脂酸（Stearic acid），软脂酸（软脂酸，Palmitic acid），和/或油酸（Oleic acid），这是因为上述三种脂肪酸是存在于动物、植物及微生物中最常见的饱和/不饱和游离脂肪酸。正常情况下，人体血液中上述三种脂肪酸的浓度维持在生理范围内，血脂异常患者血液中上述三种脂肪酸浓度出现不同程度的增高。硬脂酸钠（Sodium stearate）、软脂酸钠（软脂酸钠，Sodium palmitate）和油酸钠（Sodium oleate）分别是上述三种脂肪酸的钠盐，同等摩尔浓度的硬脂酸钠/软质酸钠/油酸钠具有与硬脂酸/软质酸/油酸相同的细胞脂毒性，且溶解度分别高于硬脂酸/软质酸/油酸。因此，硬脂酸钠/软质酸钠/油酸钠被认为是模拟细胞脂毒性的理想试剂。然而，市场上尚无直接使用的液体硬脂酸钠/软质酸钠/油酸钠高脂细胞试剂盒，加上配制方法不当，导致很多从事血脂异常相关疾病研究的科研工作者无法顺利开展体外细胞实验。

目前，有人采用甲醇、乙醇等有机溶剂，盐酸/硫酸、氢氧化钠溶液等强酸强碱类溶剂配制液体硬脂酸钠/软质酸钠/油酸钠，然而，这些溶剂既对细胞具有毒性，也不能有效溶解硬脂酸钠/软质酸钠/油酸钠。

产品简介：

1.       实验用棕榈酸钠/油酸钠试剂盒的有效成分是棕榈酸钠（Sodium palmitate，10mmol/L）和油酸钠（Sodium oleate, 20mmol/L），用于模拟高自由脂肪酸环境。

2.       本产品经0.22μm滤器过滤除菌，可直接加入到含血清（一般为10%）细胞培养基中。

3.       本产品所用溶剂不含NaOH或有机溶剂，对细胞无毒性。

4.       本产品可用于诱导脂肪肝细胞模型（图1），也可用于诱导多种细胞的胰岛素抵抗模型。

参考文献：

1）Cardiac-specific CGI-58 deficiency activates the ER stress pathway to promote heart failure in mice：Palmitic acid (PA) and its solvent (vehicle) were purchased from Kunchuang Biotechnology (Xi’an, Shanxi, China), in which PA was coupled to FA-free bovine serum albumin (BSA) in a ratio of 2mM PA:3% BSA

2）High-fat diet impairs ferroptosis and promotes cancer invasiveness via down regulating tumor suppressor ACSL4 in lung adenocarcinoma：Acid palmitate was obtained from Xian Kunchuang Science and Technology Develop Co. Ltd (Xian, China)

3）Lipid-induced DRAM recruits STOM to lysosomes and induces LMP to promote exosome release from hepatocytes in NAFLD Oil red O staining and intracellular triglyceride measurement For FA treatment, 0.3 mM PA or bovine serum albumin solution (Kunchuang Biotechnology, Xian, China) was incubated with the cultured HepG2 cells.

4）Monocyte-derived extracellular vesicles upon treated by palmitate promote endothelial migration and monocytes attachment to endothelial cells Saturated FFA palmitate (16: 0) and its solvent(Cat. No. SYSJ001) were purchased from Kunchuang biotechnology.

5）Optimization of Porphyran Extraction from Pyropia yezoensis by Response Surface Methodology and Its Lipid-Lowering Effects Palmitic acid (PA) was provided by Kunchuang Biotechnology (Xi’an, China). All other chemical reagents used were of analytical grade.

6）The combined impact of decabromodiphenyl ether and high fat exposure on non-alcoholic fatty liver disease in vivo and in vitro Sodium palmitate and sodium oleate were purchased from Kunchuang Technology Development Co., Ltd. (Xian, China).

7）The impact of sitagliptin on macrophage polarity and angiogenesis in the osteointegration of titanium implants in type 2 diabetes Endothelial cell medium containing 25 mmol/L glucose and 500 mmol/L bovine serum albumin-conjugated palmitate (Kunchuang Biotechnology, Xi’an, China, Cat#: SYSJ001) was used as the mimic milieu of type 2 diabetes (high glucose and fat) which accounts for over 90 % cases in diabetic patients .

8）Wanhao Gao 1, Xingchen Guo 1,et al. Monocyte-derived extracellular vesicles upon treated by palmitate promote endothelial migration and monocytes attachment to endothelial cells.Biochemical and Biophysical Research Communications .2020 May:685-691.

9）Ji L, Liu F, Jing Z, et al. MICU1 Alleviates Diabetic Cardiomyopathy Through Mitochondrial Ca2+-Dependent Antioxidant Response. Diabetes. 2017 Jun;66(6):1586-1600

10）Yan W, Zhang H, Liu P, et al. Impaired mitochondrial biogenesis due to dysfunctional adiponectin-AMPK-PGC-1α signaling contributing to increased vulnerability in diabetic heart. Basic Res Cardiol. 2013 May;108(3):329.