纤维单胞菌通用PCR检测试剂盒

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

组成及试剂配制
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。

实验外包
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建
PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
小鼠少突胶质前体细胞(MOPC)(5×105) Hep-2, 喉癌细胞系 Human葫芦素E（标准品）质量规格：HPLC≥95%，标准品Cucurbitacin E

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS3钩吻素子（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Koumine

肝内胆管上皮细胞 (HIBEC)( 5×105 )钩吻素甲（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Gelsemine

CL-0059CFPAC-1(胰腺癌细胞)5×106cells/瓶×2原B1（标准品）质量规格：HPLC≥95%，标准品Procyanidin B1

小鼠畸胎瘤细胞;P19 小鼠肺微血管内皮细胞完全培养基 100mL天麻素质量规格：HPLC≥98%，BRGastrodin

缓激肽（1-5）Bradykinin (1-5)质量规格：>95%,BR  小鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA检测试剂盒Mousehepatocytegrowthfactor,HGFELISAkit 96T/48T  ELISAKitMCP-2/CCL8小鼠单核细胞趋化蛋白2规格：48T/96T

缓激肽（1-6）Bradykinin (1-6)质量规格：>95%,BR  人肝脏甘油三脂脂肪酶(HTGL)试剂盒 Human hepatic iglyceride lipase,HTGL ELISA Kit  HamsterreceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit仓鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒规格：96T/48T

缓激肽（1-7）Bradykinin (1-7)质量规格：>95%,BR  RatHexokinase,HKELISAKit大鼠己糖激酶(HK)ELISA试剂盒规格：96T/48T  人抗单链DNA抗体/变性DNA抗体(ssDNA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

颊肽Buccalin质量规格：>95%,BR  BLOTTO10核酸杂交封闭溶液100毫升  小鼠基质金属蛋白酶3(MMP-3)试剂盒 Mouse maix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA kit

纤维单胞菌通用PCR检测试剂盒十二烷(Standard for GC,≥99.5% (GC))Dodecane质量规格：Standard for GC,≥99.5% (GC)  MouseMacrophageInflammatoryProtein3α,MIP-3αELISA试剂盒小鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒规格：96T/48T  血小板衍化生长因子(PDGF)ELISA试剂盒 ，英文名： PDGF ELISA Kit

正癸酸(Standard for GC,>99%(GC)) Decanoic 质量规格：Standard for GC,>99%(GC)  小鼠前脑啡肽(PENK)ELISA试剂盒 ，英文名： PENK ELISA Kit  Mousec-fosELISA试剂盒小鼠c-fosELISA试剂盒规格：96T/48T

己二酸二甲酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Dimethyl adipate质量规格：standard for GC,≥99.5%(GC)  人毒性休克综合征1(TSST-1)ELISA检测试剂盒Humaoxicshocksyndrometoxin,TSST-1ELISAKit 96T/48T  ELISAKitAβ1-40小鼠β淀粉样蛋白1-40规格：48T/96T

马来酸二丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Dibutyl maleate质量规格：standard for GC,≥99.5%(GC)  大鼠脂多糖/内(LPS)试剂盒 Rat Lipopolysaccharides,LPS ELISA Kit  Duckai-prothrombinsaibodies,aPT1/aPT2ELISAKit鸭抗凝血素抗体(aPT1/aPT2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
使用方法：
一、样品DNA的制备用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。