服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 规格 | 型号 |
革蜱PCR检测试剂盒 | 50T | EY00P373 |
组成及试剂配制
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
实验外包
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
支气管上皮细胞RNAHBEpiC miRNA5 μg莠灭净(标准品)质量规格:分析标准品,98.8%Ametryn
BIU-87细胞,膀胱癌细胞 稳定转染了neor和LIF基因的STO细胞株,SNL细胞 CSC, 小鼠心肌细胞草毒死(标准品)质量规格:分析标准品 Allidochlor
M1(小鼠白血病细胞) 5×106cells/瓶×2Amberlite® IRP-69阳离子交换树脂质量规格: Amberlite® IRP-69
NHEK adult single donor Pellet 正常类表皮角质细胞团块(捐献者) > 1 mio.cells 小鼠肾小管上皮细胞MREpiC氨苯蝶啶(标准品)质量规格:HPLC法含量测定Triamterene
CL-0438SF767(脑瘤细胞)5×106cells/瓶×2拉呋替丁质量规格:>99%,BRLafutidine
核黄素1酸钠水合物Riboflavin 5'-monophosphate salt hydrate质量规格:核黄素73.0 ~79.0% 人β氨基己糖苷酶A(β-hexosaminidaseA)ELISA检测试剂盒Humanβ-hexosaminidaseAELISAKit 96T/48T DuckIerleukin-4,IL-4ELISA试剂盒鸭白介素4(IL-4)ELISA试剂盒规格:96T/48T
溴化乙锭溶液,10 mg/mlEB, Ethidium bromide stock solution, 10 mg/ml质量规格:>98%,BR 大鼠血管紧张素转化酶2(ACE2)试剂盒 Rat Angiotensin conveing enzyme 2,ACE2 ELISA Kit Humananapasticlymphomakinase,ALKELISAKit人间变性瘤激酶(ALK)ELISA试剂盒规格:96T/48T
AV-951Tivozanib, AV951质量规格:>98%,VEGFR抑制剂 英文名称Ratf-β-HCGELISAKIT大鼠游离β绒毛膜促性腺激素(f-β-HCG)规格:96T/48T 人不耐热肠B亚单位(LTB)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
7,8-二氢生物蝶呤7,8-Dihydro-L-biopterin质量规格:HPLC>95%,BR 革兰氏阴性细菌基因组DNA化试剂盒20 豚鼠钩端螺旋体IgG(Leptospira)试剂盒 Guinea pig Leptospira IgG ELISA Kit
革蜱PCR检测试剂盒三甲基-β-环糊精(>98.0%(HPLC))质量规格:>98.0%(HPLC)Trimethyl-β-cyclodextrin HumanKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISA试剂盒人肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T 大鼠潜伏转化生长因子结合蛋白1(LTBP1)ELISA试剂盒 ,英文名: LTBP1 ELISA Kit
3,5-双[3,5-双(苄氧基)苄氧基]苄溴(>97.0%(HPLC))质量规格:>97.0%(HPLC)3,5-Bis[3,5-bis(benzyloxy)benzyloxy]benzyl Bromide 组织1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性荧光定量检测试剂盒20 人B因子(BF)ELISA检测试剂盒HumanfactorB,BFELISAKit 96T/48T
3,5-双(3,5-二甲氧基苄氧基)苄醇(>94.0%(GC))质量规格:>94.0%(GC)3,5-Bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyl Alcohol Humaniercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA试剂盒规格:96T/48T 鱼胰岛素(INS)试剂盒 Fish Insulin,INS ELISA Kit
3,5-双(3,5-二甲氧基苄氧基)苄溴(>97.0%(HPLC)(T))质量规格:>97.0%(HPLC)(T)3,5-Bis(3,5-dimethoxybenzyloxy)benzyl Bromide 人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 CLIAKitforPGE2ELISAKit(mouse)小鼠前列腺素E2规格:48T/96T
使用方法:
一、样品DNA的制备用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水(*用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。