服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 规格 | 型号 |
反刍兽曼氏杆菌PCR检测试剂盒 | 50T | EY00P702 |
组成及试剂配制
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
![5.jpg 5.jpg](https://www.chemicalbook.com/SupplyImg/2022-12-13/6380652530488316355856037.jpg)
实验外包
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
SF767细胞,脑瘤细胞 阴沟肠杆菌 主动脉内皮细胞总RNAHAEC NA甲硫咪唑硫代-β-D-葡萄糖苷酸质量规格:美国进口Methimazole Thio-β-D-glucuronide
RKO-E6(结肠癌转基因细胞) 5×106cells/瓶×2美洛西林质量规格:美国进口Mezlocillin
GBC-SD(胆囊癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0312293ET(胚肾细胞(SV40T和EBNA1基因修饰细胞))5×106cells/瓶×2 盘羊皮肤细胞;ASHS3二去甲基米非司酮质量规格:美国进口Didemethyl Mifepristone
小鼠肾集合管细胞(SV40转化);M-122-羟基米非司酮质量规格:美国进口22-Hydroxy Mifepristone
16. 细胞系统甲基4-羟基-2-甲基-2H-1,2-苯并噻嗪-3-羧酸盐 1,1-二氧化物质量规格:美国进口Methyl 4-Hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazine-3-carboxylate 1,1-Dioxide
二甲基亚砜(AR,>99%(GC)) Dimethyl sulfoxide质量规格:AR,>99%(GC) 英文名称HumanCollageypeIIELISAKit人II型胶原(CollageypeII)ELISAKit规格:96T/48T 人己糖激酶(HK)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
二甲基亚砜(>99.8%(GC)) Dimethyl sulfoxide质量规格:>99.8%(GC) 动物组织同还原酶1A(aldo-ketoreductase1A)活性比色法定量检测试剂盒20 小鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)试剂盒 Mouse Pulmonary Surfacta-associated protein C,SP-C ELISA kit
二甲基亚砜(分子生物学,≥99.9%) Dimethyl sulfoxide质量规格:分子生物学,≥99.9% 其它ELISA试剂盒 血栓素A2合成酶(TX-A2)ELISA试剂盒 ,英文名: TX-A2 ELISA Kit
二甲基亚砜(多肽合成) Dimethyl sulfoxide质量规格:多肽合成 小鼠前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)ELISA试剂盒 ,英文名: PCSK9 ELISA Kit MouseCompleme3,C3ELISA试剂盒小鼠补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
反刍兽曼氏杆菌PCR检测试剂盒柠檬酸二铵,柠檬酸氢二铵Ammonium , dibasic质量规格:>99%,AR 大鼠促生长激素释放激素(GRH)ELISA检测试剂盒ratgrowthhormonereleasinghormone,GHRHELISAKit 96T/48T ELISAKitPⅢNP兔子Ⅲ型前胶原肽规格:48T/96T
乳酸钙五水(>98%,USP)Calcium (L)-lactate, pentahydrate质量规格:>98%,USP 人凋亡相关半胱氨酸肽酶4(Casp4)试剂盒 human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase,Casp4 ELISA Kit DuckIerleukin2,IL-2ELISAKit鸭白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
2'-脱氧胸苷-5'-一1酸二钠盐dTMP, 2'-Deoxythymidine-5'-monophosphate di salt质量规格:>97%,分子生物学级 RatNervegrowthfactor,NGFELISAKit大鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒规格:96T/48T 人肺炎支原体抗体(MP-Ab)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
卫茅醇(>99%,分子生物学级)Dulcitol质量规格:>99%,分子生物学级 EB病毒DNA化试剂盒20 小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)试剂盒 Mouse α-L-iduronidase,IDUA ELISA Kit
使用方法:
一、样品DNA的制备用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水(*用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。