参数规格:
产品名称:中间葡萄球菌PCR检测试剂盒
型号 : EY00P1095
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
![5.jpg 5.jpg](https://www.chemicalbook.com/SupplyImg/2022-12-13/6380652530488316355856037.jpg)
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
MCF 7B(癌细胞) 5×106cells/瓶×2 BHK(幼仓鼠肾细胞)21-辛酸酯质量规格:美国进口Hydrocortisone 21-caprylate
原代神经胶质细胞培养特制添加剂Many types of cells包装:5/2.5/1ml21-半琥珀酸钠盐质量规格:美国进口Hydrocortisone 21-hemisuccinate salt
SHH Others Human SHH / Sonic hedgehog (aa 1-197) 细胞裂解液 (阳性对照) 3-(O-羧甲基)1质量规格:美国进口Hydrocortisone 3-(O-carboxymethyl)oxime
大鼠颈上皮细胞完全培养基 100mL21-半琥珀酸酯质量规格:美国进口Hydrocortisone 21-hemisuccinate
Reh急性非B非T细胞白血病 Reh human acute non B non T lymphocytic leukemia IMDM培养基(GIBCO)+10%FBS氢化大豆卵1脂;氢化卵1脂质量规格:>95%,BRHSPC;Lecithins Hydrogenated
中间葡萄球菌PCR检测试剂盒蛋白酶K(Sigma)Proteinase K质量规格:≥30units/mg protein,sigma原装 英文名称HumanCXCL9/MIGELISAKit人CXCL9/MIG规格: 人肌红蛋白(MYO/MB)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
胰凝乳蛋白酶抑制剂Chymostatin质量规格:进分 多巴胺(Dopamine)转运功能检测试剂盒20 小鼠促有丝分裂因子(MF/MPF)试剂盒 Mouse maturation promoting factor,MF/MPF ELISA Kit
亮抑蛋白酶肽(进口)Leupeptin 质量规格:≥95%,进口半硫酸盐 ELISAKitDBA双花扁豆凝集素规格:48T/96T 血管内皮抑素抗体(ES-Ab)ELISA试剂盒 ,英文名: ES-Ab ELISA Kit
胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制剂Pepstatin A microbial质量规格:≥90%,进分 小鼠凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISA试剂盒 ,英文名: FⅦ ELISA Kit Mouseendotoxin,ETELISA试剂盒小鼠内(ET)ELISA试剂盒规格:96T/48T
麦迪霉素质量规格:美国进口Midecamycin CLIAKitforVD2ELISAKit大鼠维生素D2规格:48T/96T 大鼠细胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
米诺地尔葡萄糖苷酸质量规格:美国进口Minoxidil Glucuronide 荧光细胞流式仪完全间接检测试剂盒(含一抗和荧光二抗)10 人胃蛋白酶原II 试剂盒 Human Pepsinogen II ELISA Kit
加兰他敏(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品无 ELISAKitPI3K人1酸肌醇3激酶规格:48T/96T 酸(PA)测试盒 可见分光光度法 50管/48样
甲基莲心碱(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Neferine 小鼠CD80分子(CD80/B7-1)ELISA试剂盒 ,英文名: CD80/B7-1 ELISA Kit RatPlateletFactor4,PF-4ELISA试剂盒大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒规格:96T/48T