参数规格:
产品名称:核型多角体病毒PCR检测试剂盒
型号 : EY00P833
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
FAM171B Others Human FAM171B / KIAA1946 细胞裂解液 (阳性对照) 爱维莫潘质量规格:删除;精神管制Alvimopan
颅骨造骨细胞cDNAHCO cDNA3-磺炳基十四烷基二甲甜菜碱质量规格:>98.0%,BRMyristyl sulfobetaine
猪肾细胞;PK(15) 骨髓瘤细胞,FO细胞 G422细胞,KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株3-磺炳基十六烷基二甲甜菜碱质量规格:>98%,BR3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate(SHDAB)
表达SV40T和EBNA1的胚肾细胞;293ETDBD-ED [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(2-氨基乙基氨基)-2,1,3-苯并恶二唑]质量规格:用于高效液相色谱标记DBD-ED [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(2-aminoethylamino)-2,1,3-benzoxadiazole]
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Egypt/2321-NAMRU3/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 细胞裂解液 (阳性对照) AABD-SH (=4-乙酰氨基-7--2,1,3-苯并恶二唑](>94.0%(HPLC))质量规格:>94.0%(HPLC)AABD-SH (=4-Acetamido-7-mercapto-2,1,3-benzoxadiazole)
核型多角体病毒PCR检测试剂盒铋标准溶液(100mg/L,基体: 5%HNO3)质量规格:100mg/L,基体: 5%HNO3Bismuth solution 大鼠前列腺素F2α(PGF2α)ELISA检测试剂盒RatProstaglandinF2α,PGF2αELISAKit 96T/48T HumanEerovirusELISA试剂盒人肠病毒(Eerovirus)ELISA试剂盒规格:96T/48T
铜标准溶液(1000μg/ml,基体:1.0 mol/L HNO3)质量规格:1000μg/ml,基体:1.0 mol/L HNO3Copper solution 人β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)试剂盒 Human amyloid beta peptide 25-35,Aβ25-35 ELISA Kit HumanHepatitisGvirusIgG,HGV-IgGELISAKit人庚型肝炎病毒IgM(HGV-IgM)ELISA试剂盒规格:96T/48T
低粘度羟丙基纤维素质量规格:150~400 mpa.s,BRHPC, hydroxypropyl cellulose 英文名称MouseCardiolipinIgGELISAKit小鼠心1脂抗体CardiolipinIgG(ACAIgG)规格:96T/48T 鸡5核苷酸酶(5-)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
L(+)酸二钠二水(>98%,BC )质量规格:>98%,BC L(+) tartrate dihydrate RPMI1640完全培养液(无抗生素)500毫升 人胰脂肪酶(PL)试剂盒 Human Pancreatic Lipase,PL ELISA Kit
灵芝酸G(标准品)Ganoderic G 质量规格:HPLC≥98%,标准品 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA检测试剂盒Ratlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit 96T/48T GuineaPigEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISA试剂盒豚鼠内皮型合成酶(eNOS)ELISA试剂盒规格:96T/48T
6-苄氨基嘌呤6-Benzylamino purine质量规格:>99% 人雌激素受体β(ESR2)试剂盒 Human Esogen receptor beta,ESR2 ELISA kit Humanai-cellmembraneDNAaibody,cmDNAELISAKit人抗细胞膜DNA抗体(cmDNA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
水(HPLC grade)Water质量规格:HPLC grade Ratsolubleierleukin-2receptor,IL-2sRβELISAKit大鼠白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)ELISA试剂盒规格:96T/48T 人表面膜球蛋白A(mIgA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
马来酸,顺丁烯二酸Maleic 质量规格:AR,HPLC>99% IKB-ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 兔ELSIA试剂盒