猪内源性逆转录病毒前病毒PCR检测试剂盒

参数规格：
产品名称：猪内源性逆转录病毒前病毒PCR检测试剂盒
型号　:　　 EY00P923
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程：
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释， 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下：
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，
轻微振荡混匀，简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管，分别标记为 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。
3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中，  然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s，涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作，稀释操作同步骤 4。
                                 表 2. CHO control DNA 的稀释

二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加样浓度  (以制备加 45pg  CHO control DNA 的样本 ERC 为例)，操作如下：
1，取待测样本 100u，加至 1.5ml 干净的离心管中；
2，加入 1.5ul SD2，混匀，标记为样本 ERC。
注：样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备

根据实验设置阴性质控，操作如下：
1，取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注：阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1，根据所要检测的标准曲线及待测样本数量，计算所需反应孔数，一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数=  (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注：待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。                  2，根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix：
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul    (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix=  (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O=  (反应孔数+2) ×2ul
3，各试剂置于冰上融化，振荡混匀，按表 3 所示进行加样：
                                  表 3.各反应孔加样示例

注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6.为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
 CL-0293MuM-2B(眼脉络色素瘤细胞)5×106cells/瓶×2BOC-D-shēng huà shì jì容量：1公斤

293A，胚肾上皮细胞系(腺病毒包装级别) 小鼠胚胎成纤维细胞(前脂肪)，3T3L1细胞 Hs 683(脑视神经胶质瘤细胞)亚肖基红盐 1-nitnOSO-2-NcPHTHOL-3,6-DISULFONIC cCID DIwo7ium ScLT 1922/2/3

侵袭性脉络膜色素瘤细胞;MuM-2B副溶血性弧菌增菌液shēng huà shì jì容量：5克

CADM1 Others Human  CADM1 / IGSF4A 细胞裂解液 (阳性对照) 35mm玻底培养皿shēng huà shì jì容量：保存：-20℃1KU

293来源病毒包装细胞;ΦA-GP溴;3-溴-1-; 炔丙基溴Propargyl broMide;

猪内源性逆转录病毒前病毒PCR检测试剂盒安息香甲基(>98.0%(GC))Benzoin Methyl Ether质量规格：>98.0%(GC)  大鼠骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA检测试剂盒RatOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit 96T/48T  ELISAKitLIFR兔子白血病抑制因子受体规格：48T/96T

安息香异丁基(>95.0%(GC))Benzoin Isobutyl Ether质量规格：>95.0%(GC)  人丁型肝炎病毒(HDV)抗原试剂盒 Human hepatitis D virus(HDV) aigen ELISA Kit  Chickenviruseeritis,DEVELISAKit鸡病毒性肠炎病毒(DEV)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2,2-二乙氧基苯乙酮(>95.0%(GC))2,2-Diethoxyacetophenone质量规格：>95.0%(GC)  Ratmyelinbasicprotein,MBPELISAKit大鼠髓1脂碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒规格：96T/48T  人富组蛋白(histatin 5)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

2,2-二甲氧基-2-乙酮(>98.0%(GC))2,2-Dimethoxy-2-phenylacetophenone质量规格：>98.0%(GC)  DNA银染试剂盒5  小鼠β-防御素1 试剂盒 Mouse β-Defensins 1 ELISA Kit

克林霉素质量规格：美国进口Clindamycin  HumanIerleukin-2receptor,IL-2RELISA试剂盒人白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒规格：96T/48T  大鼠缺氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒 ，英文名： HIF-1α ELISA Kit

4-羟基氨苯蝶啶质量规格：美国进口4-Hydroxy Triamterene  组织1酸二酯酶2(PDE2)活性酶连续循环光谱法定量检测试剂盒10  人表皮细胞活化肽因子(CAPF)ELISA检测试剂盒HumanCicularActivePeptideFactor,CAPFELISAKit 96T/48T

4-羟基氨苯蝶啶硫酸钠盐质量规格：美国进口4-Hydroxy Triamterene Sulfate,  Salt  HumanIerleukin18，IL-18ELISAKit人白介素18(IL-18)ELISA试剂盒规格：96T/48T  植物1,5-二1酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)试剂盒 Pla Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase(RuBisCO)ELISA Kit

2,4-二氨基-6-苯基-7-蝶啶质量规格：美国进口2,4-Diamino-6-phenyl-7-pteridinol  人乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  CLIAKitforPIAb-IgG/IgM)ELISAKit大鼠1脂酰肌醇抗体IgG/IgM规格：48T/96T