里氏立克次氏体PCR检测试剂盒

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

组成及试剂配制
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。

实验外包
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建
PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
Ca Ski 肠转移细胞盐酸贝他定质量规格：美国进口Bestatin

HCCC-9810胆管细胞型肝癌细胞 HCCC-9810 human cholangiocarcinoma cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSN-去甲基二盐酸三氟拉嗪质量规格：美国进口N-Desmethyl Trifluoperazine Di

TGFB1 Protein Human 重组 Late TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白 (His 标签)双硫仑-d20质量规格：美国进口Disulfiram-d20

髓核细胞(HNPC)(5×105) NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系 Mouse脱氧胆酸钠盐质量规格：美国进口Deoxycholic ,  Salt

小鼠肺腺癌低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);LA1-VAP33-GFP二乙二醇二丁基(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)Diethylene Glycol Dibutyl Ether

α-促激素质量规格：>95%,BRα-MSH  猪细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)试剂盒 Porcine iercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit  食物总抗氧化能力(TAC)化学发光法定量检测试剂盒50

β-淀粉样蛋白(1-42),人质量规格：>95%,BRβ-Amyloid Peptide (1-42), human  Humanbrain-gpeptides,BGP/GehrelinElisakit 人脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装  ELISAKitLATS人长效甲状腺刺激素规格：48T/96T

[Nle8’18,Tyr34]-甲状旁腺激素(7-34)酰胺 (牛)质量规格：>95%,BR[Nle8’18,Tyr34]-pTH (7-34) amide (bovine)  HumanL-phenylalanine,LPAELISA试剂盒人苯氨酸(LPA)ELISA试剂盒规格：96T/48T  大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

[Phe2,Orn8]-催产素质量规格：>95%,BR[Phe2,Orn8]-Oxytocin  组织肾素(renin)荧光共振能量转移法(FRET)定量检测试剂盒20  人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)试剂盒 Human Serine/threonine-protein kinase B-raf,BRAF ELISA kit

里氏立克次氏体PCR检测试剂盒芥酸甲酯（标准品）质量规格：>90.0%(GC) Methyl cis-13-docosenoate  英文名称RatAZTELISAKit大鼠叠氮胸苷(AZT)规格：96T/48T  猴可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

十九酸（标准品）质量规格：分析标准品,≥99.5% (GC)Nonadecanoic   酵母总ATP酶(totalATPase)活性比色法定量检测试剂盒20  人胰蛋白酶(ypsin)试剂盒 Human ypsin ELISA Kit

铋粒(>99%,BR)质量规格：>99%,BRBismuth, granular  ELISAKitSS人生长抑素规格：48T/96T  人抗杀菌通透性蛋白抗体(BPI-Ab)ELISA试剂盒 ，英文名： BPI-Ab ELISA Kit

β-萘氧乙酸钠(植物激素级)质量规格：>98%，植物激素级BNOA-Na, β--Naphthoxyacetic   salt  小鼠补体成分4b(C4b)ELISA试剂盒 ，英文名： C4b ELISA Kit  RatHaptoglobin,Hpt/HPELISA试剂盒大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
使用方法：
一、样品DNA的制备用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。