参数规格:
产品名称:鰤鱼诺卡氏菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)
型号 : EY00P1713
产品规格:48T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
盐酸赛洛唑啉(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Xylometazoline CLIAKitforVEGF-B(HumanVascularEndothelialcellGrowthFactorB)ELISAKIT人血管内皮细胞生长因子B规格:48T/96T 大鼠纤维蛋白原γ链(Fgg)ELISA试剂盒 ,英文名: Fgg ELISA Kit
盐酸赛洛唑啉质量规格:>98%,BRXylometazoline 印迹AP-BCIP/NBT底物显色试剂盒10 人抗斑疹伤寒抗体(ai-typhus-Ab)ELISA检测试剂盒Humanai-typhusaibodyELISAKit 96T/48T
拉坦前列素内酯二醇质量规格:美国进口Latanoprost Lactone Diol ELISAKitSCCAg人鳞状细胞癌相关抗原规格:48T/96T 大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)试剂盒 Rat 6-K-PGF1a ELISA Kit
拉坦前列腺素内半缩醛质量规格:美国进口Latanoprost Lactol 小鼠DNA(胞嘧啶-5)甲基转移酶3B(DNMT3B)ELISA试剂盒 ,英文名: DNMT3B ELISA Kit CLIAKitforsCD14ELISAKit大鼠可溶性CD14规格:48T/96T
鰤鱼诺卡氏菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)缬更昔洛韦盐酸盐 质量规格:>99%,USPValganciclovir HumanIerleukin13,IL-13ELISA试剂盒人白介素13(IL-13)ELISA试剂盒规格:96T/48T 大鼠热休克蛋白20(HSP-20)ELISA试剂盒 ,英文名: HSP-20 ELISA Kit
肌醇质量规格:>99%,BRInositol 组织科萨基病毒B(CoxsackievirusB)定性检测试剂盒20 人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)ELISA检测试剂盒HumanMacrophageColony-StimulatingFactorReceptor,M-CSFRELISAKit 96T/48T
肌醇(标准品)质量规格:>99%,标准品Inositol Humanininsicfactoraibody,IFAELISAKit人抗内因子抗体(IFA)ELISA试剂盒规格:96T/48T 植物L-抗坏血酸过氧化物酶2,细胞质(APX2)试剂盒 Pla L-ascorbate peroxidase 2,cytosolic(APX2)ELISA kit
4'-羟基氟比洛芬质量规格:美国进口4'-Hydroxy Flurbiprofen 人乙酰肝素酶(HPA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 CLIAKitforPIELISAKit大鼠胰岛素规格:48T/96T
载玻片细胞TNFBETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20 146501-37-3沙苑子苷A说明书 Complanatoside A
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小鼠脂联素(Adiponectin/Acrp30)ELISA试剂盒 ,英文名: Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit 40437-72-7山柰酚-3-O-葡萄糖鼠李糖苷规格 Kaempeerol-3-Oglucorhamnoside
牛胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA检测试剂盒BovineInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit 96T/48T 4373-41-5山楂酸厂家 Maslinic
人alpha突触核蛋白(淀粉样前体非A4成分蛋白)低聚物(SNCA oligomer)试剂盒 Human SNCA oligomer ELISA Kit 64421-28-9山栀苷甲酯说明书 Dipsacoside B