参数规格:
产品名称:创伤弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
型号 : EY00P1647
产品规格:48T0.1 PCR管/48T 0.2PCR管
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
盐酸特比萘芬(标准品)Terbinafine HCl质量规格:HPLC>99%,标准品 犬促肾上腺皮质激素(ACTH)试剂盒 Canine adrenocoicoopic hormone,ACTH ELISA kit 人视黄酸诱导基因/RIG-1样受体(RLR)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
醋酸特立帕肽/重组人甲状旁腺激素(1-34)Teriparatide acetate/Human PTH(1-34)质量规格:>95% 英文名称HumanDHEA-S-7ELISAKit人脱氢表雄同-S-7(DHEA-S-7)规格:96T/48T 小鼠坏死因子α(TNF-α)试剂盒 Mouse Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT
托伐普坦 Tolvaptan质量规格:度≥99.0%,BR,可用于细胞培养 大量植物组织叶绿体DNA萃取试剂盒5(20克/) 猪内源性逆转录病毒前病毒(PERV-pre)核酸检测试剂盒 48T
磺胺噻唑Sulfathiazole质量规格:>99%,BR Ratkeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISA试剂盒大鼠角化细胞因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒规格:96T/48T Humanplacealribonucleaseinhibitor,HPRIELISA试剂盒人胎盘核糖核酸抑止剂(HPRI)ELISA试剂盒规格:96T/48T
创伤弧菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)辛胺(标准品)n-Octylamine质量规格:分析标准品,≥99.5%(GC) ELISAKitAIL-R4人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4规格:48T/96T 相扑结合酶UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)ELISA试剂盒 ,英文名: UBE2I/UBC9/UBCE9 ELISA Kit
十八烷(标准品)Octadecane质量规格:分析标准品,≥99.5%(GC) 小鼠膜联蛋白A1(ANXA1)ELISA试剂盒 ,英文名: ANXA1 ELISA Kit MouseIerferonα,IFN-αELISA试剂盒小鼠α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒规格:96T/48T
2-辛酮(标准品)2-Octanone质量规格:分析标准品,≥99.5%(GC) 人胸腺非依赖性抗原(TI-Ag)ELISA检测试剂盒Humahymusindependeaigen,TI-AgELISAKit 96T/48T ELISAKitsCD40L兔子可溶性白细胞分化抗原40配体规格:48T/96T
蓓萨罗丁(标准品)Bexarotene质量规格:>99% 大鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)试剂盒 Rat Insulin-like growth factor 2,IGF-2 ELISA Kit ChickenIerleukin2,IL-2ELISAKit鸡白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
小鼠脂质运载蛋白1(LCN1)ELISA试剂盒 ,英文名: LCN1 ELISA Kit 477-43-0去氢木香内酯说明书 Dehydrocostus lactone
犬α干扰素(IFN-α)ELISA检测试剂盒CanineIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T 83-44-3去氧胆酸品牌 Deoxycholic
犬热休克蛋白60,线粒体(HSPD1/Hsp-60)试剂盒 Dog 60 kDa heat shock protein,mitochondrial,HSPD1 ELISA kit 529-59-9染料木苷规格 Genistin
英文名称HumanInhibinBELISAKit人抑制素B(INHB)规格:96T/48T 446-72-0染料木素厂家 Genistein
化RNA样品储存液50毫升 19666-76-3人参二醇说明书 Panaxadiol