包纳米虫（Bona）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

参数规格：

产品名称：包纳米虫（Bona）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 

货号:EY00P1789

产品规格：48T
产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

运输：低温

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验操作过程：

一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备

用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释， 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下：

1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，

轻微振荡混匀，简短快速离心。

2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管，分别标记为 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。

3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。

4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中，  然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s，涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。

5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作，稀释操作同步骤 4。
                                 表 2. CHO control DNA 的稀释

二、加样回收质控 ERC 的制备

根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加样浓度  (以制备加 45pg  CHO control DNA 的样本 ERC 为例)，操作如下：

1，取待测样本 100u，加至 1.5ml 干净的离心管中；

2，加入 1.5ul SD2，混匀，标记为样本 ERC。

注：样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。

三、阴性质控 NEG 的制备

根据实验设置阴性质控，操作如下：

1，取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注：阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。

四、 qPCR 反应液的制备和加样

1，根据所要检测的标准曲线及待测样本数量，计算所需反应孔数，一般做 3 个重复孔/样。

反应孔数=  (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注：待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。                  2，根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix：

2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul    (含有 2 孔的损失量)

10×CHO qPCR mix=  (反应孔数+2) ×3ul

RNase-free H2O=  (反应孔数+2) ×2ul

3，各试剂置于冰上融化，振荡混匀，按表 3 所示进行加样：

                                  表 3.各反应孔加样示例

注意事项

1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。

2.为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。

3.每次实验应该设置阴、阳性对照。

4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。

5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。

6.为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。

7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。

8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。

9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。

 人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa检测试剂盒

 小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)ELISA试剂盒

 人癌胚抗原(CEA/CD66)elisa检测试剂盒

 人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)elisa检测试剂盒

 人卵巢癌标志物CA25elisa检测试剂盒

 人乳腺癌标志物-CA53elisa检测试剂盒

 人胃肠癌标志物CA99elisa检测试剂盒

 人胰腺癌标志物CA242elisa检测试剂盒

 人鳞状上皮细胞癌抗原2(SCCAg-2)elisa检测试剂盒

 人胃癌标志物elisa检测试剂盒

 人肺癌标志物elisa检测试剂盒

 人髓鞘碱性蛋白抗体(MBP)elisa检测试剂盒

 人基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-)elisa检测试剂盒

 人微量转铁蛋白(MTF)elisa检测试剂盒

 小鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒

 人铁蛋白(FE)elisa检测试剂盒

 人细胞周期素D(Cyclin-D)elisa检测试剂盒

 人细胞周期素D2(Cyclin-D2)elisa检测试剂盒

 人细胞周期素D3(Cyclin-D3)elisa检测试剂盒

 人转铁蛋白受体(TFR/CD7)elisa检测试剂盒

 人黑色素细胞抗体(MCAb)elisa检测试剂盒

 人克拉拉细胞蛋白(CC6)elisa检测试剂盒

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（5×，还原）（可提供标记服务）

TBS (Tris Buffered Saline, pH7.2, 10x)（可提供标记服务）

AuraStain SP鼠/兔IHC试剂盒（可提供标记服务）

TMB底物显色试剂盒（可溶型）（可提供标记服务）

RIPA裂解液（弱）（可提供标记服务）

蓝色预染蛋白分子量标准(20-120 kDa)（可提供标记服务）

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（5×，非还原）（可提供标记服务）

TBST (Tris Buffered Saline Tween-20, pH7.5, 10x)（可提供标记服务）

RIPA裂解液（强中弱套装）（可提供标记服务）

考马斯亮蓝染色液（常规法）（可提供标记服务）

SDS-PAGE凝胶电泳缓冲液 (10x)（可提供标记服务）

AuraStain SP鼠IHC试剂盒（可提供标记服务）

丽春红染色液（可提供标记服务）

NP-40裂解液（可提供标记服务）

考马斯亮蓝染色脱色液（常规法）（可提供标记服务）

SDS-PAGE凝胶转膜缓冲液(10x)（可提供标记服务）

蛋白示踪上样缓冲液（还原，5×）（可提供标记服务）

SDS裂解液（可提供标记服务）

G250蛋白快速染色试剂（可提供标记服务）

1.5M Tris-Cl (pH8.8)（可提供标记服务）

包纳米虫（Bona）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）AuraStain SP兔IHC试剂盒（可提供标记服务）

蛋白示踪上样缓冲液（非还原，5×）（可提供标记服务）

0.5M Tris-Cl (pH6.8)（可提供标记服务）

Western Blot转膜液（粉剂）（可提供标记服务）

30% Acr-Bis (29:1)（可提供标记服务）