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PCR?核酸检测试剂盒

询价 1盒 起订
上海 更新日期:2024-11-08

上海一研生物科技有限公司

VIP3年
联系人:吴菲
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邮箱:3427709316@qq.com

产品详情:

中文名称:
PCR?核酸检测试剂盒
品牌:
一研
产地:
国产
保存条件:
2-8℃
产品类别:
PCR试剂盒
规格:
50T

PCR 核酸检测试剂盒试剂盒组份:

表 1:试剂盒组份

 

试剂

装量

贮存条

CHO control DNA

40ul×1 

-20oC

DNA dilution buffer

6ml ×1 

-20oC

2×Taqman master mix (+UNG/ROX)

0.75ml ×2 

-20oC

10×CHO qPCR mix

0.3ml ×1 

-20oC

RNase-Free H2O

1.5ml×1 

-20oC

规格 :100  反应

用机型:

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)

 

验所需但试剂盒未包含材料:

 

Ø 1.5ml 无菌低吸附离心管

Ø 96 孔 qPCR  

Ø 一次性手

Ø 1000ul 100ul 10ul 无菌低吸附带滤芯移液枪头

 

关设备:

Ø  离心机

Ø 涡旋振荡

Ø 荧光定量 PCR 

Ø 1000ul 100ul 10ul 移液器

实验操作过程:

 

一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备

用试剂盒中供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 30pg/ul 3pg/ul 300fg/ul 30fg/ul 3fg/ul 。具体操作如下:

1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,

振荡混匀,简短快速离心。

2.取 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 SD2 SD3 SD4 SD5, SD6

3SD管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer

4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD管中,  然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 次。

5,按表 依次行 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4

 2. CHO control DNA 的稀释

释管

释体积

浓度

SD1

2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer

300 pg/ul

SD2

20ul SD1+180ul DNA dilution buffer

30 pg/ul

SD3

20ul SD2+180ul DNA dilution buffer

pg/ul

SD4

20ul SD3+180ul DNA dilution buffer

300 fg/ul

SD5

20ul SD4+180ul DNA dilution buffer

3fg/ul

SD6

20ul SD5+180ul DNA dilution buffer

3 fg/ul

、加样回收质控 ERC 的制备

根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加样浓度  (以制备加 45pg  CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:

1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 净的离心管中;

2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC

:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。

三、阴性质控 NEG 的制备

据实验设置阴性质控,操作如下:

1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理

四、 qPCR 反应液的制备和加样

1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 个重复孔/样。

反应孔数=  (个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2×注:待样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC                   2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix

2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul    (含有 孔的损失量)

10×CHO qPCR mix=  (反应孔数+2×3ul

RNase-free H2O=  (反应孔数+2×2ul

3各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 所示进行加样:

 3.各反应孔加样示例

 

标准曲线

20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6

NTC

20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer

NEG

20ul pre-mix+ 10ul NEG

测样本

20ul pre-mix+ 10ul  待测样本

ERC 样本

20ul pre-mix+ 10ul ERC 样本

 

加样完成后每孔总体积为 30ul

表 4. 96 孔板排版示例

 


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

SD6

SD6

SD6


S1

S1

S1


S1

ERC

S1

ERC

S1

ERC


B

SD5

SD5

SD5


S2

S2

S2


S2

ERC

S2

ERC

S2

ERC


C

SD4

SD4

SD4


S3

S3

S3


S3

ERC

S3

ERC

S3

ERC


D

SD3

SD3

SD3










E

SD2

SD2

SD2










F

SD1

SD1

SD1










G

NTC

NTC

NTC










H

NEG

NEG

NEG










注:该表示例的是检测 个浓度梯度的 CHO  control  DNA 标准曲线(SD1-SD6) 个无 板对照 NTC个阴性质控 NEG个待测样本(S1-S3)和每个样本的 ERC(S1 ERC-SERC)。 每个检测做 个重复孔。

 

4.   96 孔板用光学膜封闭,轻微振荡混匀,短时间快速离心后放入 qPCR 仪中。

 

PCR 核酸检测试剂盒qPCR 程序参数设置(以 ABI 7500 为例):

 

1.创建空白新程序,选择绝对定量检测模块。

2.创建新检测探针,命名为 CHO-DNA,选择报告荧光基团为 FAM,淬灭基团为 none,检测 参比荧光为 ROX

3.设置两步法反应程序: 95oC 预变性 10min95oC 10 sec60oC 1min40 个循环; 应体积为 30ul

qPCR 结果分析(以 ABI 7500 为例)

1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中, 将 Threshold 设置为 0.05 ,点击 Analyze,此时可 步查看扩增曲线的形态是否正常。

2.在 Results  的 Plate 面板中,将标准曲线孔的 Task 一栏设置为 Standard,并且在 Quantity 一栏分别赋值为 3000 300 30 0.3 0.03  (含义为每孔的 DNA 量, 单位为 pg), 并且

在相应的 Sample Name 一栏命名为 SD1 SD2 SD3 SD4 SDSD6

3.在 Results 的 Plate 面板中,将无模板对照 NTC 孔的 Task 一栏设置为 NTC,将阴性质控 NEG 孔、待测样本孔、样本 ERC 孔的 Task 一栏设置为 Unknown,并且在相应的 Sample Name 一栏中命名为 NTC NEG ERC ,之后点击开始键。

4.在 Results 的 Standard Curve  面板中,可读取标准曲线的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2 

5.在 Results 的 Report 面板中, Mean Quantity 一栏可读取无末班对照 NTC阴性质控 NEG 待测样本、样本 ERC 的检测值。后续可在检测报告中将单位换算为 pg/ml  样本

:根据待测样本和样本 ERC 的检测结果计算加样回收率,加样回收率要求在 50%- 150% 




PCR?核酸检测试剂盒;

公司简介

上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂等为一体的科研产品销售企业,公司自成立以来,秉承""全心全意服务于科研工作者""的企业理念,立足生物科技领域,运用生物技术和科研试剂,发展现代生物科技,为各类大中小医院及其它医疗机构、高等院校、科研院所、企事业单位提供优质的产品,服务生物科技领域的科学研究人员。 公司具有对普通货物、冷藏及冷冻仓库的存储、包装及运输能力。 公司将始终坚持信誉立业、以人为本、质量保证、诚信服务的宗旨,不断拼搏,开拓进取,与各界朋友携手共创美好未来。

成立日期 (11年)
注册资本 100
员工人数 50-100人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 工厂,试剂
主营行业 生化试剂,抗体,细胞培养,分子生物学,免疫安全

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