U266人多发性骨髓瘤细胞（STR鉴定正确）

人骨髓瘤细胞 U266产品基本信息

　　细胞名称：U266，人骨髓瘤细胞

　　种属来源：人

　　组织来源：B 细胞

       细胞形态：淋巴母细胞样

　　生长特性：悬浮生长

　　培养基:89%DMEM+10%FBS+PS

　　生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

　　传代方法：1:2至1:4，每周 2-3次

　　冻存条件：无血清细胞冻存液，液氮储存

　　支原体检测：无

　　1)复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后轻轻吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

　　2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

　　a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。

　　b、根据细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

　　c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

　　培养注意事项

　　1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

　　2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

　　3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞。死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

　　4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的完全培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

　　5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

　　6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

　　7. 该细胞仅供科研使用。

　　8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后一次传代建议1：2传代 。

　　9. 注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

悬浮细胞收货注意事项： 1、收货时需镜下拍照（看密度、状态）

 2、静置后需镜下拍照（看整体密度） a.如密度 50%以下，建议换液并竖瓶培养 b.如密度 50%-80%，建议换液培养，隔天观察密度 c.如密度 90%，建议传代

3、换液及传代处理前，培养瓶竖着放置至少半小时（使细胞沉到瓶底）；收集上清，必须将 瓶内所有培养基（70ml）全部收集！并用 PBS（10ml）润洗瓶底并收集！离心转速为 1000rpm， 5min。