NCI-H446人小细胞肺癌细胞（STR鉴定正确）

　　人小细胞肺癌细胞 NCI-H446产品基本信息

　　细胞名称：NCI-H446，人小细胞肺癌细胞

　　来源：ATCC

　　规格：1×106cells/T25或1mL冻存管

　　细胞货期现货，1周左右

　　种属来源：人

　　组织来源：肺

　　细胞形态：上皮细胞样

　　生长特性：贴壁生长

　　培养基:：90%1640+10%FBS+PS

　　生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

　　传代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

　　冻存条件：无血清细胞冻存液，液氮储存

　　支原体检测：无

　　注意事项：该细胞贴壁时间稍微长一些，处理后 24h 内尽量不要移动，该细胞对温度和 CO2 浓度比 较敏感，条件不适宜细胞容易脱落，不贴壁或贴壁较慢。

　　细胞培养操作

　　1)复苏细胞

　　将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

　　2)细胞传代

　　如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min(视细胞情况而定)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

　　c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

　　3)细胞冻存

　　待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

　　a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

　　b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

　　c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

　　培养注意事项

　　1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。

　　2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

　　3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞，死亡破碎形成碎片，是正常现象。.观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

　　4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的完全培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

　　5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

　　6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

　　7. 该细胞仅供科研使用。

　　8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后一次传代建议1：2传代 。

　　9. 注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。