CRFK（猫肾细胞）

1.细胞起源：

细胞简称 CRFK

细胞别称 CrFK; Crfk; Crandell Reese Feline Kidney; Crandell Feline Kidney; CCC;Crandell's Cat Cell

细胞背景描述 CRFK细胞不含牛病毒性痢疾(BVD)病毒。

供体年龄 雌；12周龄

组织来源 肾，皮层；正常

细胞形态 上皮细胞样

细胞类型 自发永生化细胞

生长特性 贴壁细胞

生物安全等级 1

2.培养及保藏：

完全培养基 MEM（ATCC改良）(PM150467)＋10% FBS(164210-50)＋1% P/S(PB180120)

培养环境 空气，95%；CO ₂，5%

37℃

冻存条件 55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

液氮

3.传代方法：

传代步骤 

1、吸出原培养液；

2、加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃；

3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；

4、放入培养箱消化，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显变圆有间隙时可终止，全程不要拍打培养瓶；

5、加入3ml含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱壁并在液体里反复吹打使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；

6、收集细胞悬液离心，1200rpm/min 3分钟，离心完吸出上清丢弃；

7、加入新鲜培养基，吹打几下混匀细胞即可，按比例接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

消化时间 2~3分钟

传代比例（密度） 1:3-1:4

换液频次 2~3次/周