PKH26红色荧光细胞链接试剂盒

PKH26荧光细胞连接试剂盒采用采用本公司专利膜标记技术，能够将带有较长脂质尾巴的黄色-橙色荧光染料结合到细胞膜脂质区域上。染色方式依赖于细胞与膜的类型，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究及体内外细胞示踪研究。试剂盒中提供染色过程中所需的溶剂（稀释液C），该溶剂可以可以在染色过程中，增加染料溶解度和染色效率，同时维持细胞活力。稀释液C与哺乳动物细胞等渗，且不含去垢剂或有机溶剂，也不含生理盐水和缓冲盐。根据细胞类型及标记后细胞膜内在的变化，标记后的细胞表面会由均一透亮变得有点状凸起或补丁状。但在生理范围内，PKH26荧光不受pH的影响，每个细胞的荧光强度与染料标记位置无关。

PKH26荧光在黄色-橙色区域（λex=551 nm,  λem=567 nm），可用来标记追踪体内外多种细胞。在细胞毒性分析，荧光蛋白、抗体或DNA染料在该区域发出的紫色、绿色、红色和远红外等，不会与PKH26产生干扰。PKH26最常被用于基于染料稀释增殖的分析的染料稀释应用，包括建立抗原特异性前体频谱和正常或肿瘤组织中静止或缓慢干细胞或祖细胞的鉴定。同时PKH26也可用于监测外来病毒、血小板和其他纳米颗粒的摄入；干细胞分裂过程中膜的分配；细胞-细胞之间膜的转移；细胞吞噬作用；抗原呈递；粘附；通过间隙连接的信号传递；以及组织切片中的神经元迁移。PKH26荧光稳定性很强，特别是标记的细胞的研究周期超过一周时PKH26被用于体内细胞追踪研究。

注意事项：

● 染料的工作液随用随配，不要将配好的染料贮存，影响染⾊效果。

●PKH26染色过程中，不能存在叠氮化物或代谢毒性物。

●虽然贴壁细胞也可以染色，但为获得均匀染色，单细胞悬液。因此用蛋白酶（trypsin/EDTA）将贴壁细胞消化成单个悬浮细胞后再染色效果更佳。

●染色前去除血清和脂质以提高染色效果。

●盐的存在会导致染料形成颗粒，干扰染色反应。因此，加染料前细胞重新悬置是很重要的。染料应直接加到细胞悬液中，而不是加到细胞团上。

● 过度的细胞标记将导致膜完整性丧失、细胞数量下降。本样品细胞和染料浓度是参照浓度适合大部分细胞，但染料/细胞由使用者根据细胞类型和实验目的决定，另外使用者还要评估细胞的生存力（排碘），荧光强度，荧光峰值的变异系数，染色的均匀性。

● 染⾊浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少⽽异。不同的细胞种类标记后可以⽰踪的代次或时间差异较⼤，请根据实际情况或参考⽂献进⾏检测。

操作注意：快速均匀的混合对标记非常重要，为获得效果应采取下述措施：
1） 混合时细胞悬液和工作染液应等量；
2） 避免染太多(>5ml)或太少（<100ul）的液体。避免用沾血清的移液管加染料；
3） 液体量应尽可能精确以保证细胞和染料浓度被精确复制。
4）染料和稀释液作用于细胞的时间尽量短，有一定毒性。可用稀释液按上述步骤作用于细胞看其受损程度。
5） 加等量血清终止反应，在终止染色反应前别离心稀释液C中的细胞，清洗时用含血清培养基可增加清洗效果。
6） 细胞应单独移至新试管中离心，清洗3次时不用稀释液C而用培养基。
7） 可用于体外干细胞、淋巴细胞、单核细胞、内皮细胞等的标记较理想。
8） 全细胞标记应先于单抗染色的标记，当4℃单抗染色时细胞跟踪探针将保持稳定；如后于单抗染色的标记，很可能出现“盖帽”现象。
9） 染色细胞用2%多聚甲醛固定稳定性达3w以上。

所需材料：

均匀的单细胞悬液；含血清培养基；无血清培养基或不含Ca2+Mg2+的PBS液；血清、白蛋白或与培养基兼容的蛋白源；聚丙烯锥形离心管；温度可控的离心机（0-1000g）；荧光分析仪（荧光计，荧光显微镜，流式细胞仪，荧光图象分析仪）；超净台；细胞计数仪；载玻片。

操作步骤：