细胞膜荧光探针深红色DiR碘化物

英文名称DiR iodide

中文名称DiR 碘化物(细胞膜红色荧光探针)

别    名1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindotricarbocyanine Iodide; DiR; DiIC18(7);  

保存条件Store at -20℃, protect from light.

产品介绍DiR is a lipophilic carbocyanine near infrared fluorescent dye.

DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色,这类染料在整个细胞膜上扩散,*浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显:DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发,有着比DiI更长的激发波长和发射波长,在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。

储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。

溶解性:可溶于无水乙醇、DMSO和DMF,其中在DMSO中溶解度大于10mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热,并用超声处理以促进溶解。

使用方法

1. DiD,DiO,DiI,DiR和DiS细胞膜染色液制备

(1)配置DMSO或EtOH 储存液:储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1~5 mM。

注意:未使用的储存液保存在-20 oC,避免反复冻融。

(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5 μM的工作液。

注意:工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找*条件。

2. 悬浮细胞染色

(1)悬浮细胞密度为 1 × 106/mL加入到工作液中。

(2)在37 ℃培养细胞 2~20分钟,不同的细胞*培养时间不同。

(3)染色细胞试管在1000~1500转离心5分钟。

(4)倾倒上清液,再次缓慢加入预温37℃的培养液。

(5)重复(3),(4)步骤两次以上。

3. 粘壁细胞的染色

(1)使粘壁的细胞在无菌实验室培养。

(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。

(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

(4)在37 ℃培养细胞 2~20分钟,不同的细胞*培养时间不同。

(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,培养5~10分钟,然后吸干培养基。

4. 显微镜检测

(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

(2)多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:

a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;

b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;

c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005

5. 流式细胞仪的检测

DiD,DiO,DiI,DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测。