肌酸脒基水解酶

　　货号：HH0202-01；HH0202-02；HH0202-03；HH0202-04

　　技术指标

　　外观：白色无定型冻干粉末；蛋白纯度：≥90%；比活性：≥4U/mg酶粉；过氧化氢酶：≤0.03%；肌酐酶：≤0.01%；肌氨酸氧化酶：≤0.01%NADH氧化酶：≤0.01%。

　　酶学性质

　　来源：微生物；分类：EC3.5.3.3；分子量：48kDa(SDS-PAGE)；等电点：4.6；Km值：1.7×10-2M(Creatine)；抑制剂：Ag+，Cu2+，Hg2+；最适：pH7.5；最适温度：45-50℃；pH稳定性：4.5-10.0(25℃,16h)；热稳定性：50℃以下稳定(pH7.5,30min)；稳定性：-20℃静置保存12个月保持90%以上活性；保护剂：EDTA及糖类物质。

　　用途：水解肌酸，用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。

　　尿素（Urea）和DAB（ρ-dimethylaminobenzaldenhyde）反应形成的黄色染料的量可通过分光光度计在435nm检测。

　　酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化反应生成1μmol肌酸完全转化为肌氨酸所需的酶量。

　　试剂准备

　　试剂I：0.1M肌酸溶液。

　　试剂II：将2.0gDAB溶解在100mL二甲亚砜中，并加入15mL浓盐酸。

　　酶稀释液：50mMPBS，pH7.5,样品用酶稀释液将酶稀释至2.0-3.0U/mL。

　　操作步骤

　　1.取1mL试剂I于5mLEP管中，37℃预热5min。

　　2.加入0.1mL酶液，混匀。

　　3.37℃水浴反应10min后，加入2.0mL试剂II终止反应，并在25℃放置20min。

　　4.使用紫外分光光度计，测定反应液在435nm处吸光度值。

　　5.酶稀释液代替酶液作为空白对照。