细胞到cDNA一步法试剂盒

一、 试剂盒简介

本试剂盒是简单快速从细胞到cDNA的一步法试剂盒，无需复杂的RNA提取步骤，即可获得高质量的cDNA。 具体过程是：根据细胞数，按照80 µl /10万细胞的量加Cell Lysis Buffer，吹吸10次，充分裂解细胞；立即吸出4 - 8 µl细胞裂解产物，加入逆转录试剂，充分混匀后，只需42℃、25 min即可得到cDNA。

二、 产品组分

三、 保存条件

此试剂盒建议置于-20℃冰箱中保存。

四、试剂盒特点

1、简单、快速：仅需2步、30 min即可获得高质量的cDNA。

2、所需样品少：最低可提取1000个细胞。

3、 安全无毒：不使用苯酚、氯仿、异丙醇、DEPC水等对身体有害的物质。

五、注意事项

1、本试剂盒是专为qPCR设计的，尽量不要用于基因克隆。

2、建议用24、48或96孔板培养细胞。细胞密度达到80%为。

3、细胞从培养箱中取出后建议放在室温，切勿放在冰上，以免影响细胞状态。

4、初次使用时建议对细胞进行计数，之后可参考细胞估数图进行估数。

5、Cell Lysis Buffer解冻后，需颠倒几次使之充分混匀，再放在冰上以备使用，请勿涡旋振荡。

6、本试剂盒是根据细胞来加裂解液，裂解液最少应该能够充分覆盖培养孔底部，否则过少容易导致吹出泡沫，或者裂解不充分。

7、RT Enzyme Mix和2× RT Buffer在使用前都要上下颠倒混匀，短暂离心至管底。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使Tip插入液面过深，否则会因Tip壁粘着造成损失，而使酶量不足。

8、当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。