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NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性测定试剂盒

1500 1盒 起订
上海 更新日期:2024-11-22

上海雅吉生物科技有限公司

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产品详情:

中文名称:
NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性测定试剂盒
保存条件:
2-8℃
产品类别:
试剂盒 生化试剂盒

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性测定试剂盒说明书

                                           微量法100管/96样

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性测定试剂盒测定意义:

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员,催化氧化型P450还原再生。

 

测定原理:

NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C,还原型细胞色素C550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm吸光度的增加速率,来计算NCR活性。

 

自备仪器和用品:

普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

 

试剂组成和配置:

试剂一:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前根据用量每瓶100mL蒸馏水充分溶解。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1管,-20℃保存。临用前配制,加1.04 mL蒸馏水充分溶解,4℃保存。

试剂四:粉剂×1管,4℃保存。临用前配制,加1100 μL蒸馏水充分溶解,4℃保存。

 

粗酶液提取:

1、除去细胞核和线粒体等:称约0.5g组织,加入4℃预冷的1 mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转移到超速离心管中。

2、粗制微粒体:4℃100 000g,离心60min,弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。

4、最终微粒体:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL,盖紧后充分震荡溶解,4℃保存待测。

NADPH-细胞色素C还原酶测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到550 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在37℃水浴中预热30min

3. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL蒸馏水、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10s和第130s吸光值。△A空白管=A2-A1

4. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL提取液、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10s和第130s吸光值。△A测定=A4-A3

注意:空白管只需做一次。

 

NCR活性计算公式公式

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

 

活性单位定义:37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素C1个酶活单位

NCR ((nmol/min /mg prot)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷Cpr×V样)÷T

= 550×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

2)按样本质量计算

活性单位定义:37℃中,每克组织每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素C1个酶活单位

NCR ((nmol/min/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(V÷V样总×W)÷T

=275×(△A测定管-△A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素C摩尔消光系数,19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cmd:比色皿光径(cm),1cmV反总:反应体系总体积(L),210μL=2.1×10-4LCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),10μL=0.01mLV样总:提取液体积,0.5 mLT:反应时间(min),2min

 

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素C1个酶活单位

NCR ((nmol/min/mg prot)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷Cpr×V样)÷T

= 1100×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

2)按样本质量计算

活性单位定义:37℃中,每克组织每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素c1个酶活单位

NCR ((nmol/min/g 鲜重) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(V÷V样总×W)÷T

= 550×(△A测定管-△A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素C摩尔消光系数,19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cmd96孔板光径(cm),0.5cmV反总:反应体系总体积(L),210μL=2.1×10-4LCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),10μL=0.01mLV样总:提取液体积,0.5mLT:反应时间(min),2min

 

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性测定试剂盒注意事项:

试剂三、试剂四临用前配制,配好未使用完的4可保存两天。

 



NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活;NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活;

公司简介

上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。 公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持,物流售后服务等多部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户,雅吉生物的试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员好评,先后在权威杂志文章中被引用。 本公司郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到。

成立日期 (14年)
注册资本 50.000000万人民币
员工人数 50-100人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 试剂,定制,试剂,定制
主营行业 抗体,抗体

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