还原糖含量试剂盒

果糖（fructose ，FT）含量试剂盒说明书

                                分光光度法50管/48样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

果糖（fructose ，FT）含量试剂盒测定意义：

果糖是一种最为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中，能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品生产中。

还原糖含量试剂盒测定原理：

果糖与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水

试剂的组成和配制

还原糖含量试剂盒说明书  

                                  分光光度法50管/24样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

还原糖含量试剂盒测定意义：

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等，是最常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

测定原理：

加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与540nm吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样品中还原糖的量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：100mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：15mL×1瓶 ，4℃保存；

样品中还原糖的提取：

1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议1000万细菌或细胞加入2mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次），转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min并且振荡8~10次，8000g，25℃离心10min，取上清供测定用。

2、组织的处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.2g组织，加入2mL试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min并且振荡8~10次，8000g，25℃离心10min，取上清供测定用。

3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.2mL血清（浆）加入2mL试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min并且振荡8~10次，8000g，25℃离心10min，取上清供测定用。

测定步骤：

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 调节水浴锅至95℃。

3、 在EP管中加入下列试剂：

将各管摇匀，在95℃水浴中加热5min（盖紧，防止水分散失），取出后立即冷却至室温，混匀。在540nm波长下读取对照管和测定管吸光值。计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

注意：如果ΔA大于2，需要将样本用试剂一稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数（若显色后出现分层现象，可改用蒸馏水稀释）。

还原糖含量计算：

1、标准条件下测定回归方程为y = 8.3796x- 0.3034；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

2、按样本鲜重计算：

还原糖(μg/g鲜重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W

3、按样本蛋白浓度计算：

还原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr

4、按细菌或细胞密度计算：

还原糖(μg /10⁴ cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（1000×V1÷V2）=0.239×(ΔA＋0.3034)

5、按血清（浆）体积计算：

还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（V3×V1÷V2）=1193.4×(ΔA＋0.3034) 

1000：1mg/mL=1000µg/mL；V1：加入样本体积，0.7mL；V2：加入提取液体积，2 mL；V3：加入血清（浆体积），0.2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000：细菌或细胞总数，1000万。

注意：最低检测限为1mg/g鲜重或10μg/mg p

：

提取液：液体 100ml×1瓶，4℃保存；

试剂一：1mg/mL标准液10mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体 40ml×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体 15ml×1瓶，4℃避光保存；

试剂四：粉剂0.5g×1瓶，常温保存。

果糖提取：

称取0.1~0.2g样本，常温研碎；加入1mL提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；置于80℃水浴锅中10min（盖紧，以防止水分散失），振荡3~5次，冷却后，4000g，25℃离心10min，取上清；加入少量（约2mg）试剂四，80℃脱色30min（盖紧，以防止水分散失）；再加入1mL提取液，4000g，25℃离心10min，取上清液测定。

果糖（fructose ，FT）含量试剂盒测定步骤：

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：

混匀，95℃水浴反应30min（盖紧，以防止水分散失），冷却后测定480nm处光吸收值，空白管、标准管和测定管分别记为A1、A2和A3。

果糖含量计算：

1、果糖含量（mg/mg prot）=（C标准管×V1）×(A3－A1)÷(A2－A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷（A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行测定蛋白浓度。

2、果糖含量(mg/g鲜重）=（C标准管×V1）×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= 2× (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。

C标准管：标准管浓度，1mg/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，2mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

注意：最低检测限为100ng/g鲜重或1ng/mg