支链淀粉含量试剂盒

支链淀粉含量试剂盒说明书

                                 
                                          分光光度法 50管/48样

注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

支链淀粉是具有高度分支的多糖，淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响，对于不同比例直、支链淀粉的淀粉的研究具有重要的意义。

支链淀粉含量试剂盒测定原理：

利用80％乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，利用双波长比色法测定支链淀粉含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体50mL×1瓶；4℃保存；

试剂二：乙醚50mL×1瓶；4℃保存；(自备)

试剂三：液体50mL×1瓶；4℃保存；

试剂四：液体4mL×1瓶；4℃保存；

试剂五：液体1mL×1瓶；4℃保存；

淀粉提取： 

称取0.01~0.02g烘干样本（建议称取约0.01g）于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂二（乙醚）振荡5min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂三充分溶解，90℃水浴10min，冷却后待测。

支链淀粉含量试剂盒测定步骤：

1、 分光光度计预热30min以上，蒸馏水调零。

测定管：在EP管中依次加入100uL样本， 70uL试剂四，600uL蒸馏水，10uL试剂五，220uL蒸馏水，混匀，分别测定550和743nm处吸光值，ΔA测定=A550-A743。

空白管：在EP管中依次加入100uL试剂三，70uL试剂四，600uL蒸馏水，10uL试剂五，220uL蒸馏水，混匀，分别测定550和743nm处吸光值，ΔA空白=A550-A743。

支链淀粉含量计算：

标准条件下测定的回归方程为y=0.1214x+0.0076；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按样本干重计算

支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA测定-ΔA

空白-0.0076) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

最低检测限为10mg/g干重或0.1mg/mgprot。