注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
植物硝态氮试剂盒测定原理：
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。
自备实验用品及仪器：
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×2瓶，4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加2mL浓硫酸充分溶解。
试剂二：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1支，4℃保存。
样本处理：
按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，室温匀浆后置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，期间不断晃动或者置于90℃恒温摇床中振荡提取30min，待冷却后于25℃，12000g离心15min，取上清待测。（深色植物匀浆后加入约3mg试剂三后再提取）
植物硝态氮试剂盒测定操作表：
| 空白管 | 测定管 |
样本（μL） |
| 30 |
蒸馏水（μL） | 30 |
|
试剂一（μL） | 60 | 60 |
充分混匀，25℃静置30min |
试剂二（μL） | 1425 | 1425 |
混匀，涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，取1mL于1mL玻璃比色皿中测定410nm处吸光值A，△A=A测定管-A空白管 |
注意：空白管只需测定一次。
计算公式：
标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N含量（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V样总）
=64.1×（△A-0.0073）÷W
V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
注意事项：
1. 试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。
2. 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
3. 最低检出限为2μg/g。
一．试剂配制
1、标准溶液
盐酸标准溶液[c (HCl)=0.1000 mol/L]，移取9 mL 浓盐酸（盐酸浓度36%～38%）用蒸馏水稀释并定容至1000 mL容量瓶，摇匀，用无水碳酸钠进行标定。
无水碳酸钠标定方法：取50mL蒸馏水，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配置好的盐酸溶液滴定至溶液由变为暗红色，消耗盐酸体积记为V0；再准确称取经300℃烘干1小时的无水碳酸钠0.2g，精确至0.0001，记为m，溶于少量蒸馏水中定容至50mL，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配置好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸3分钟，冷却后继续滴定至溶液呈暗红色，消耗盐酸体积记为V。
C（HCl）=m/[(V-V0)*0.05299],其中C（HCl）单位为mol/L。
2、40%氢氧化钠溶液1000 ml（400 g/L）
400g氢氧化钠溶解于1000mL无氨蒸馏水中；
3、2%浓度硼酸溶液2000 ml （20g/L）
分析纯硼酸40g溶于2000ml无氨蒸馏水中；
4、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂
A：称取0.1g 甲基红，用无水乙醇定容至100 ml；
B：称取0.1g 溴甲酚绿，用无水乙醇定容至100 ml.
临用时按照A:B=1:5混匀。取10ml加入1000ml硼酸溶液中。
5、高锰酸钾溶液：2.5g高锰酸钾溶于50mL蒸馏水中。
6、1:1硫酸溶液：100mL浓硫酸缓慢加入100ml蒸馏水中，边加边搅拌。
二．样品消解
1. 将植物样本粉碎，80℃烘干至恒重，过40目筛，称取约0.3g，加入消化管中，同时取空消化管两支，用移液管分别往每管中加入10mL浓硫酸，轻轻晃动消化管。
2. 将20支消化管全部置于石墨消解仪上，盖好盖子，打开废气回收系统以及石墨消解仪，温度设置为：曲线加热100℃，10min；280℃，10min；400℃，40min。
3. 取出消化管冷却至室温，切勿在样品冷却之前开盖。每支消化管中缓慢加入1mL过氧化氢，摇匀，重新
放置在石墨消解仪上，温度设置为：曲线加热200℃，10min；320℃，30min；400℃，30min。
4. 取出消化管冷却至室温，切勿在样品冷却之前开盖。每支消化管中缓慢加入0.5mL过氧化氢，摇匀，重新放置在石墨消解仪上，温度设置为：曲线加热200℃，10min；320℃，30min；400℃，60min。若样本未呈现澄清状态，应继续加热至澄清，即消解完全。
5. 关闭石墨消解仪，待样品冷却后关掉废气回收系统。
三．全氮测定
1. 将滴定酸桶，硼酸桶，碱桶，蒸馏水桶管路按照标示插好（滴定酸桶的管子应插到底部），将硼酸桶，碱桶，蒸馏水桶的液位检测插好。
2. 打开定氮仪与循环水系统，进入清洗界面，先进行两次硼酸清洗管路，再进行一次换酸清洗，一次碱管路清洗。
3. 装一只空的消化管，关好防护门。点击【测试】菜单系统自动进入操作模式界面，选择【自动测试】，常规，设置参数为：样品编号；样品重量：0.000g。滴定酸浓度：标定好的盐酸浓度(mol/L)；空白值：0.000mL；蛋白系数：样品固定的转换系数。硼酸：15ml；稀释水：20mL；碱液：0mL；蒸馏：5min；设置完成后，点击【确定】即可进入自动测试功能。
4. 测试完成后打印测定结果。
5. 打开安全门，戴棉质手套取出消化管，放入样品空白管，关好防护门。点击【测试】菜单系统自动进入操作模式界面，选择【自动测试】，常规，碱液参数设置为40mL，其余参数同步骤3，重复步骤3。
6. 样品测定：设置参数为：样品编号；样品重量：称取的样品实际质量，g。滴定酸浓度：标定好的盐酸浓度(mol/L)；空白值：两支空白管滴定用酸量的平均值，mL；蛋白系数：样品固定的转换系数。硼酸：15ml；稀释水：20mL；碱液：40mL；蒸馏：5min；设置完成后，点击【确定】即可进入自动测试功能。
7. 测试完成后打印测定结果。
8. 进行仪器清洗，然后关闭循环水系统及定氮仪，然后清洁仪器。
四．注意事项
1. 禁止使用边缘有缺口，或者有裂缝的消化管进行消解，消解时盖子放置好，以免废气泄露，消解仪工作状态尽量不要靠近仪器，但是要经常观察管内变化，若出现异常情况，立即断电。
2. 开始蒸馏时，消化管中液体的总体积以不超过总体积的1/3。
3. 拿取消化管时，注意高温烫伤。放置消化管时，左右旋转几下，确保消化管与蒸馏头密封。
4. 每日做完实验要用洗瓶冲洗蒸馏头残余碱液，仪器前部的槽皿中，如果积有液体，请擦洗干净。
5. 为了延长防溅装置的使用寿命，请每天工作结束后清洗两次左右：即消化管加水150mL空蒸5分钟。（空蒸仪器把加碱量设置为“0”）。
6. 关机前，需将接收杯内液体排净，仪器使用结束后要关闭水源、电源，仪器上要放置一空消化管（防止防溅装置内残留液体流到仪器上）。
7. 做完实验将消解管清洗干净（包括壁内和壁外），然后放烘箱烘干，烘干后若长时不用则收起来。消解仪各部位上若有硫酸残留需及时擦拭干净一面被腐蚀，消解仪盖子以及托盘需长清洗保持洁净。
