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口蹄疫病毒C亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)
3800 1盒 起订
上海 更新日期:2024-11-22

上海雅吉生物科技有限公司

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产品详情:

中文名称:
口蹄疫病毒C亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
英文名称:
Foot-and-Mouth Disease Virus(FMDV)
保存条件:
-20度
产品类别:
PCR试剂盒

【口蹄疫病毒C亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒利用PCR原理,定性检测病毒,对病毒引起的疾病诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】

利用离心柱内硅基质膜提取RNA,在反转录酶的作用下,以RNA为模板,以引物为起点合成与RNA模板互补的cDNA链。在TaqDNA聚合酶的作用下,经高温变性、低温退火、中温延伸的循环,使特异DNA片段的拷贝数放大一倍。经过35次循环,最终使扩增DNA片段放大了数百万倍。将扩增DNA片段进行电泳,经染色后,在紫外灯照射下,肉眼可见到DNA片段的扩增带。

【主要组成成份】

组成

50T/

PPRV RT-PCR反应液

750 μL×1

PPRV 混合酶液

150 μL×1

PPRV 阳性对照

40 μL×1

PPRV 阴性对照

40 μL×1

说明书

1

注:阴性对照为基因组DNA,阳性对照为失去活性的猫冠状病毒cDNA

【储存条件及有效期】-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

需自备的物品PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪可调移液器琼脂糖等相关试剂及设备

【注意事项】

1.病毒具有很强的感染能力,操作前必须准备好各种防御措施。

2.操作时须严格按照步骤进行,废物必须放入含消毒液的废物缸,以免污染实验室和工作人员。

3.为避免其他核酸的污染而出现假阳性,必须使用不含DNARNA的离心管、吸管、枪头、试剂和手套,操作人员须戴口罩。

【实验准备】

如果是提取病毒RNA,请选用RNase free Tip枪头和1.5 ml离心管或将枪头和离心管用0.1% DEPC水处理后再使用。

口蹄疫病毒C亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒操作步骤】

1.样品处理

(1). 适用标本类型:发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。

(2). 标本采集,方法如下:

a.血清:用一次性注射器取静脉血2-3ml,转至5ml 的干燥管中,密闭送检。

b.肠内容物:无菌条件下取肠道内容物约1g 左右,置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)5ml 离心管中,立即送检。

c.组织脏器:取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g,置一1.5ml的洁净离心管中,密闭送检。

(3).应避免标本间交叉污染。

(4).标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于28℃冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80以下,避免反复冻融。

2. 提取过程

QIAGENRoche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3. RT-PCR扩增

1)每份总体积20 µL15 µL RT-PCR反应液(用前混匀),3µL 混合酶液,2 µL模板RNA

例如:n份样品,配制n+1份,15×n+1RT-PCR反应液, n+1)混合酶液匀后取18 µL分装成n份,分别加入2 µL模板RNA,作好标记。

2)在PCR扩增仪上进行以下程序:50 ℃ 10 min94 ℃ 3 min;循环94℃ 30 s55 ℃ 30 s72 ℃ 30 s,共35次;再72 ℃延伸7 min

4. 电泳

1.5 g琼脂糖放于500 mL锥形瓶中,加入1倍TAE电泳缓冲液100 mL(取2 mL 50倍TAE电泳缓冲液,用双蒸水稀释至100 mL),于微波炉中熔解,待冷却至50℃左右再加入50 µL染色液(自备)混匀。在电泳槽内放好梳子,倒入琼脂糖凝胶,待凝固后将PCR扩增产物中加入4µL上样缓冲液(自备)混匀后取10 µL点样于琼脂糖凝胶孔中,以110~120V电压于1倍TAE电泳缓冲液中电泳,紫外灯下观察结果。(注:染色液是2000×,上样缓冲液是6×)

结果判定

阳性对照出现191 bp扩增带、阴性对照无带出现引物带除外时,实验结果成立。被检样品出现口蹄疫病毒C亚型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒关联产品

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口蹄疫病毒C亚型探针法荧光定量RT-PC;

公司简介

上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。 公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持,物流售后服务等多部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户,雅吉生物的试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员好评,先后在权威杂志文章中被引用。 本公司郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到。

成立日期 (14年)
注册资本 50.000000万人民币
员工人数 50-100人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 试剂,定制,试剂,定制
主营行业 抗体,抗体

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