钙含量比色检测试剂盒测定方案

钙对于所有生物来说都是必不可少的，因为钙离子在生物体内被吸收并释放到生物体内细胞质外信号是许多细胞过程的信号。99%的钙是钙在骨骼和牙齿中发现，其余1%在血液和软组织中发现。血清钙水平受到严格控制（8.4-11.4 mg/dL），超出此范围的任何变化都可能导致死亡有严重影响。钙在调节血管收缩和舒张中起作用血管、神经冲动传递、肌肉收缩和激素分泌。

钙离子通道控制钙离子在细胞膜上的迁移，允许激活和抑制多种酶。低钙的原因这些水平包括慢性肾功能衰竭、维生素D缺乏和低血镁水平这可能发生在严重的酒精中毒。BioVision的比色钙测定试剂盒利用钙离子与0-甲酚酞形成的显色络合物（λ=575nm），以在生理上重要的钙浓度0.4范围内提供一种简单的测定方法-100毫克/分升（0.1-25毫米）。

艾美捷 BioVision 钙比色法检测试剂盒利用钙离子和O-苯酞酚形成的显色复合物（λ = 575 nm）的原理，使用O-苯酞酚与样本中的钙离子反应后通过比色计或分光光度计实现定量.

钙含量比色检测试剂盒测定方案：

1.标准曲线制备：通过添加10%的钙，将钙标准稀释至5 mM（20 mg/dL）将500 mM标准溶液的µl与990µl dH2O充分混合。将0,2,4,6,8,10µl添加到一系列溶液中每孔提供0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0µg钙。将体积增加到50µl，并使用二氧化二氢。

2.样品制备：血清或尿液样品可直接用于本试验。放置10微升在96孔板中的孔中取样。对于其他液体样品，将2–50µl样品添加到溶液中个人井。用dH2O使总体积达到50µl。样品可以化验没有任何事先治疗。一些MRI造影剂会在这种情况下引起短暂的干扰化验

3.补充：

A） 将90µl显色试剂添加到每个含有标准品、样品或试剂的孔中控制并轻轻混合。

B） 向每个孔中添加60µl钙分析缓冲液并轻轻混合。

4.在室温下培养反应5-10分钟。避光。

5.在575 nm处测量外径。发色团是不稳定的，随着时间的推移会稍微褪色，所以在30分钟内阅读标准品和样品。

6.计算：通过减去从0计算得出的值来校正背景所有样品和标准读数的控制（注：背景读数可能为重要，必须从样本读数中减去）。绘制标准曲线µg/井vs。外径575纳米读数。然后将样本读数应用于标准曲线，以获得井中的钙样本量（Sa）。试样中的钙浓度：C=Sa/Sv（微克/微升或毫克/毫升）式中：Sa是标准曲线中的钙样品量（单位：µg）。Sv是添加到样品孔中的样品体积（µl）。钙分子量：40。样品中的钙浓度可以表示为mg/ml、mg/dL或mM（mmol/升）。1毫克/毫升=100毫克/分升；1毫米=4毫克/分升

图：（a） 标准曲线。（b） 从汇集的人血清（10μl，1:1稀释）和混合人类尿液（10μl，1:1稀释）。试验在试验结束后进行工具包协议。