T-47D（人乳腺管癌细胞）

细胞收到后要怎样处理？

冷冻细胞解冻程序:

1.根据细胞说明书来配置培养基，不同的细胞株适应的培养基不同，请务必按细胞需求来配置。

绝大多数的细胞均无法立即适应不同的基础培养基或不同的血清种类，所以当细胞换成你们自己的培养基生长状态变差或者速度变缓的时候，不要着急，可以静养一段时间。给细胞一个适应的时间，不要一日看三回，操之过急；如实验确实紧张，可以使用中乔新舟细胞株完全培养基，此培养基是按细胞精心优化，种类丰富，适合中乔新舟任意一株细胞的培养。若因实验需要，必须有所不同时， 请务必以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞生长适应后，方进行实验。

2.FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞说明书选择相应的血清 ，这点很重要。

细胞复苏的方法：

1.将培养基置于37 °C 水槽中回温， 回温后喷以70 % 酒精并擦拭之， 移入无菌操作台内。

2.取出冷冻管， 立即放入37 °C 水槽中快速解冻，水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿， 否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后，以70%ethanol擦拭冷冻管外部，移入无菌操作台。

3.依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基，混合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。

4.对绝大多数细胞而言，1 % 以下的冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻的 细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。

5.对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO ， 去除DMSO的方法如下：可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中，离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培养箱培养。

活细胞的处理方式︰

1. 细胞在寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask 均加满培养基。收到后，请检查flask 外观，并于显微镜下观察细胞生长和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知我们。

2. 将原封的T25 flask细胞 静置于细胞 培养箱中，让细胞稳定一下，并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。2-4小时后，无菌操作箱内取出flask内之培养基，仅留约5-10ml 培养基于flask 内，如无需传代，请置于培养箱中继续培养，如细胞已达到85%以上的密度，请立即将细胞做传代处理。