3T3-L1（小鼠胚胎成纤维细胞）

一、细胞基本属性

细胞名称：小鼠胚胎成纤维细胞

细胞别称：3T3-L1; 3T3L1; 3T3L1; 3T3-L1 ad; NIH-3T3-L1; NIH3T3-L1

细胞货号：SNL-022

细胞种属：小鼠

生长情况：贴壁

培养条件：H-DMEM+10%FBS+1%双抗

培养环境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、细胞培养操作

换液周期：2-3天

培养基体积：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

传代比例：1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法：

1.尽量吸干净T25瓶原培养基；

2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；

4.将培养瓶放入37度培养箱消化；

5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；

6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；

7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；

8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；

注意事项：不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间

消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

三、细胞冻存操作

冻存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);

冻存规格：200-300万/ml，1ml每管

冻存方法：

1. 离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；

2. 将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；

3. 将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存

注意事项 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

Tips：

1.细胞贴壁较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间；

2.注意控制细胞密度，过高或者过低都可能影响细胞状态，不要长时间高密度培养；

我们推荐使用尚恩生物3T3-L1（小鼠胚胎成纤维细胞）专用完全培养基（产品货号：SNLM-022）作为体外培养3T3-L1（小鼠胚胎成纤维细胞）的培养基。