油红O染色试剂盒

油红O染色试剂盒

一、产品简介。

油红 O 染液的主要成份 1-［2,5-二甲基-4-(2,5-二甲基苯偶氮)苯偶氮］-2 萘酚对脂肪具有很强的亲和性，结合细胞或组织中的脂肪后使脂滴呈现橙黄色至红色（因脂肪含量而异），随后的苏木素染液使细胞核染成蓝色，进而分析细胞或组织中脂滴的多少与分布。

二、运输与存储条件。

本产品低温运输，并按各组份保存条件分开保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 本试剂可以对细胞或组织中的脂肪进行染色，脂滴染色清晰。

2. 本产品为即用型试剂，操作方便，快速。

四、自备试剂与耗材。

60%异丙醇、去离子水（ddH2O）、PBS

五、使用说明。

1. 油红 O 工作液配制。计算需要的油红 O 工作液体积，将油红 O 存储液与ddH2O 按照 3:2 的比例混匀，室温静置 10 min，过滤，备用。

2. 细胞染色。

1) 细胞培养与成脂诱导。HepG2 或其它细胞传代后接种到 6 孔细胞培养板中，24 h 后细胞密度达到 70%左右，加入 1 mM 的游离脂肪酸（FFA）处理，诱导脂肪生成。

2) 成脂效果检测。成脂诱导 24 h，显微镜下观察，若细胞内出现透亮的脂滴，说明成脂诱导实验成功。

3) 固定。弃细胞培养液，PBS 洗涤 1-2 次，加入 1 ml 固定液（4%多聚甲醛）室温固定 20-30 min，弃固定液，ddH2O 洗涤 2 次。

4) 60%异丙醇润洗。加入 60%异丙醇，1 ml/孔，静置 5 min，弃异丙醇。

5) 油红 O 染色。加入油红 O 工作液，1 ml/孔，室温染色10-20 min。弃油红 O 染液，ddH2O 洗涤至无多余染液。

6) 苏木素染色。加入苏木素染液，1 ml/孔，室温染色 2-5 min，弃染液，ddH2O 洗涤至无多余染液。

7) 加入 ddH2O 或 PBS，1 ml/孔，显微镜下观察并拍照。

3. 组织切片染色。

1) 冰冻切片（8-10 μm）置于载玻片上，晾干。

2) 固定。将冰冻切片置于固定液中固定20-30 min，ddH2O 洗涤 3 次。

3) 60%异丙醇润洗。将冰冻切片置于60%异丙醇中，室温静置 5 min，捞出，稍微晾干。

4) 油红 O 染色。将冰冻切片置于油红 O 工作液中，室温染色 20-30 min。捞出，ddH2O 洗涤至无多余染液。

5) 苏木素染色。将冰冻切片置于苏木素染液中，室温静置 2-5 min，捞出，ddH2O 洗涤至无多余染液。

6) 滴加 ddH2O 或 50%甘油封片，显微镜下观察并拍照。

六、注意事项。

1. 油红 O 工作液应现用现配，不宜久放，容易失效。

2. 油红 O 工作液尽量过滤一下，以免沉淀影响实验结果。

3. 若室内温度太低，油红 O 工作液可以在 60 ℃水浴锅中孵育 10-30 min，增强染色效果。

4. 细胞和组织切片不宜用乙醇固定，影响油红 O 染色效果。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。