细胞裂解液Laemmli Buffer（2×）

细胞裂解液Laemmli Buffer（2×）

一、产品简介。

Laemmli Buffer (2×)是一种经典的细胞裂解液，含有十二烷基硫酸钠（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS），可以使蛋白变性，导致细胞内膜性结构的崩解和蛋白的释放。细胞裂解液中的蛋白浓度可用 BCA 法测定，并进行 SDS-PAGE 分析，是制备 western blot 样品的首选细胞裂解液。

二、运输与存储条件。

本产品常温运输和保存，有效期 3 年。

三、特点与优势。

1. 本产品为即用型试剂，与细胞混匀后，即可裂解细胞。

2. 本产品含有蛋白变性剂，可以提取细胞质、细胞核及细胞膜蛋白，提取效率高。

3. 本产品具有 Loading Buffer 的作用，裂解细胞后可以直接上样，进行 SDS-PAGE 分析。

四、自备试剂。

β-巯基乙醇（β-ME）或二硫苏糖醇（DTT）。

五、使用说明。

1. 细胞裂解。利用 Laemmli Buffer (2×)裂解细胞的方式有 2 种，分别是：

1) 胰酶消化法收集贴壁细胞或离心法收集悬浮细胞，PBS 洗涤一次，加入与细胞沉淀等体积的 Laemmli Buffer（2×），混匀，100 ℃煮沸 5 min，冰水混合物中冷却。

2) 直接裂解。6 孔板培养的细胞，弃培养液，PBS 洗涤一次，加入 100 μl Laemmli Buffer（2×），混匀，转移到 1.5 ml 离心管中，100 ℃煮沸 5 min，冰水混合物中冷却。

2. 离心。12,000 rpm，4 ℃离心 5 min，上清转移至新的 EP 管，即为细胞裂解液。

3. 蛋白浓度测定。用 Laemmli Buffer（2×）作为对照，利用 BCA 法蛋白浓度测定试剂盒测定细胞裂解液中的蛋白浓度，并计算上样体积。

4. SDS-PAGE 分析。细胞裂解液中加入还原剂，如 β-ME（终浓度为 5%）或 DTT（终浓度为 100 mM），混匀，移取适量细胞裂解液，加入聚丙烯酰胺凝胶，电泳分析。

六、注意事项。

1. 本产品与 Bio-Rad 公司的 Laemmli Buffer (2×)具有同样的裂解效果和使用方法。

2. 本产品不含还原剂，因而裂解细胞后可以用 BCA 法测定蛋白浓度。

3. 本产品会导致蛋白变性和蛋白复合物解离，因而本产品制备的细胞裂解产物不适合做免疫沉淀和蛋白激酶活性检测实验。

4. 请穿好实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜，以避免试剂飞溅导致的皮肤、眼睛或者呼吸道等部位的化学灼伤。如果不慎接触了皮肤或者眼睛，请立即用大量水冲洗，必要时去医院护理。