细胞核提取试剂盒

细胞核提取试剂盒

一、产品简介。

细胞核是细胞内的细胞器，也是遗传物质分布的重要场所，分离细胞核，可用于转录调控相关的生物学实验。本产品利用蔗糖密度梯度离心法，能够快速且完整的分离细胞核。

二、运输与存储条件。

本产品常温运输，4 ℃保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 本产品操作简单，可以快速分离细胞核。

2. 本产品分离的细胞核完整，纯度高。

四、自备试剂与耗材。

PBS、RIPA 裂解液（不含 SDS）、1.5 ml 离心管、震荡混匀仪（Vortex mixer）、冷冻离心机。

五、使用说明。

1. 细胞处理。胰酶消化法收集贴壁生长细胞，或离心法直接收集悬浮培养细胞，每个样品中细胞数量为 2×107，加入 1 ml Buffer NA，震荡（Vortex），重悬细胞。

2. 细胞裂解。将细胞重悬液转入匀浆器，匀浆 50-100 次，至显微镜下观察到 80%以上细胞都破碎为止。

3. 离心。将细胞匀浆液转移至 1.5 ml 离心管，600×g，4 ℃离心 10 min，上清转移至新的 1.5 ml离心管，即为细胞浆（可保存在-80 ℃），沉淀为粗细胞核。

4. 粗细胞核中加入 1 ml Buffer NA 重悬，600×g，4 ℃离心 10 min，弃上清。

5. 细胞核纯化。向细胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NB，震荡（vortex）重悬，16,000×g，4 ℃离心15-30 min，弃上清。

6. 细胞核洗涤。向细胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NA，震荡（vortex）重悬，600×g，4 ℃离心 10 min，弃上清，沉淀即为纯化细胞核。

7. 细胞核可暂时存放在-80 ℃冰箱中，也可立即裂解，抽提核蛋白。

8. 细胞核裂解。主要包括以下二种方式。

1) 变性裂解液裂解。利用本公司的细胞裂解液（Laemmli Buffer，2×）重悬细胞核沉淀，裂解细胞核，提取细胞核蛋白，用于 western blot 分析。但提取蛋白已经变性，不可用于酶活性测定。

2) RIPA 裂解液裂解。利用温和的 RIPA 裂解液（不含 SDS）重悬细胞核沉淀，裂解细胞核，提取蛋白，用于酶活性测定及 western blot 等实验。

六、注意事项

1. 整个操作过程需在低温条件下进行，所用试剂提前预冷。

2. 为了减少其它细胞器污染，提取的细胞浆溶液可以12,000×g，4 ℃离心15 min，弃沉淀，上清即为纯化后的细胞浆，转移至新的离心管，冻存。

3. 为了抑制蛋白降解，实验过程中可添加蛋白酶抑制剂（如cocktail等）。