无蛋白非程序性细胞冻存液

无蛋白非程序性细胞冻存液

一、产品简介。

本产品是一种不含胎牛血清和其它动物源性蛋白成份的细胞冻存试剂，由细胞膜保护剂、渗透性和非渗透性保护剂组成，并添加细胞营养物质，冻存细胞的同时提高细胞的存活率。

二、运输与存储条件。

本产品低温运输，-20 ℃保存，有效期 12 个月。使用过程中，4 ℃保存，1 个月内用完，避免反复冻融。

三、特点与优势。

1. 与市面其它类似产品相比，本产品纯由化学物质配制而成，不含任何动物源性成份，可用于常规培养细胞和临床治疗用细胞的冻存。

2. 本产品冻存细胞时不需要程序性降温盒，重悬细胞后可直接置于-80 ℃冰箱中保存，12 h 后转到液氮中保存，或一直存放于-80 ℃冰箱中保存（6 个月）。

3. 本产品冻存细胞效果好，细胞复苏率高，与含有胎牛血清（FBS）的冻存液效果一致。

4. 本产品中的 DMSO 含量为 5%，对冻存细胞的毒性较小。

四、使用说明。

1. 细胞冻存。

1) 细胞培养。细胞接种于直径为 100 mm 的培养皿中，24 或 48 h 后密度达到 80%左右，处于对数生长期。

2) 细胞收集。胰酶消化法收集贴壁细胞（或直接收集悬浮细胞），1 000 rpm，离心 5 min，弃上清。

3) 细胞冻存。加入 2 ml 无蛋白非程序性细胞冻存液，混匀，分装于 2 支冻存管，置于-80 ℃冰箱中，12 h 后转入液氮长期保存。

2. 细胞复苏。

1) 预热。提前开启水浴锅，温度调整到 37 ℃（或 42 ℃，能够促进细胞冻存液更快的融化）。

2) 细胞复苏。从液氮罐或-80 ℃冰箱中取出冻存细胞，立即置于预热后的水浴锅中，快速晃动冻存管，使冻存细胞尽快融化。

3) 离心。将融化的冻存细胞转入含有9 ml细胞培养液的离心管中，混匀，1 000 rpm，离心5 min，弃上清。（融化的冻存细胞也可直接离心）

4) 细胞培养。在离心管中加入 1 ml 的细胞培养液，混匀，转入含有 9 ml 细胞培养液的细胞培养皿中，混匀，置于细胞培养箱中培养。

5) 检测。24 h 后观察细胞贴壁情况和生长状态。

五、注意事项。

1. 为了保证细胞冻存效果，细胞冻存时应该生长良好，尽量处于对数生长期。

2. 冻存细胞的密度一般控制在 1-5 ×106 cells / mL 左右，密度过低或过高都会影响冻存效果。

3. 细胞复苏后离心除去细胞冻存液，避免细胞冻存液对细胞生长的影响。

4. 本产品冻存的细胞可以在-80 ℃冰箱中保存 6 个月，长期保存时请转入液氮罐。