慢病毒纯化试剂盒 （磁珠型）

慢病毒纯化试剂盒 （磁珠型）

一、产品简介。

本产品是一款以磁珠为分离介质的慢病毒纯化试剂。在特定的缓冲体系中，磁珠可吸附慢病毒，并被特定的洗脱液（或 PBS 与 ddH2O）洗脱下来。慢病毒纯化后，滴度提高 10 倍以上，且利用 PBS或 ddH2O 洗脱后的慢病毒不含其它化合物，可直接用于动物体内注射。

二、运输与存储条件。

本产品低温运输，4 ℃保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 本试剂纯化效率高，磁珠吸附慢病毒的效率达到 95%以上。

2. 纯化后的慢病毒滴度提高 10 倍以上。

3. 本试剂盒纯化的慢病毒不含其它化合物，可以直接用于动物实验。

4. 本试剂盒操作简单，能够在 2 h 内完成慢病毒的纯化实验。

四、使用说明。

1. 慢病毒包装。慢病毒包装实验请参考本公司产品（慢病毒包装试剂盒，Cat：OmL-01）说明书中的实验步骤。

2. 含慢病毒的细胞培养上清收集。293T 细胞（直径为 100 mm 培养皿培养）转染慢病毒包装质粒及骨架质粒后 48 h，收集批细胞培养上清（10 ml），并加入 10 ml 新鲜细胞培养液，继续培养 24-48 h，收集第二批细胞培养上清（第二批收集的细胞培养上清中慢病毒滴度高于批）。所有含有慢病毒的细胞培养上清保存在 4℃冰箱中。

3. 慢病毒纯化。本产品提供的慢病毒纯化体系是 20 ml，各组份如下表。参照下表将各种试剂与含有慢病毒的细胞培养上清加入 50 ml 无菌离心管中，置于旋转混合器中，4 ℃旋转混合 60 min。

4. 磁珠收集。将离心管置于磁力架上，4 ℃静置 5-10 min，使磁珠聚集，弃上清（或 5 000 rpm，4 ℃离心 5 min，沉淀磁珠，弃上清）

5. 残余液体去除。将装有磁珠沉淀的离心管转入离心机，5 000 rpm，4 ℃离心 1-2 min，用移液器吸尽管中残余液体。

6. 洗脱。加入 1.2 ml Buffer LE（或 PBS 与 ddH2O），剧烈震荡（Vortex）1 min，8 000 rpm，4 ℃离心 2 min，立即将上清转移至新的无菌 EP 管中，即为纯化的慢病毒溶液。

7. 过滤。利用试剂盒提供的针式过滤器，过滤纯化的慢病毒溶液，除去杂质。

8. 纯化的慢病毒可立即用于滴度测定，或感染目的细胞，也可保存在 4 ℃（有效期 1 个月）。

9. 感染细胞时，纯化的慢病毒溶液与细胞培养液按照不同比例混合（一般情况下等比例混合），加入细胞中，并添加 polybrene 或本公司的慢病毒感染增强试剂盒（Cat：OmL-04）中的病毒感染增强试剂。

10. 慢病毒感染 24 h，换液，72 h 后观察 GFP 荧光强度或检测目的蛋白表达变化。

五、注意事项。

1. 磁珠不可冻存，否则失效。

2. 强烈建议使用本公司的慢病毒感染增强试剂盒（Cat：OmL-04）来提高慢病毒的感染效率。

3. 请使用试剂盒提供的针式过滤器过滤纯化的慢病毒溶液，不要使用常规的 0.2 μm 和 0.45 μm 孔径滤膜的滤器过滤，以免降低慢病毒滴度。

4. 纯化的慢病毒保存条件：4 ℃，一个月；-80 ℃，长期保存，但冻存后慢病毒活性降低。

5. 含慢病毒的细胞培养上清不用离心和过滤，直接用于慢病毒纯化，效果较好。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。