慢病毒包装试剂盒

慢病毒包装试剂盒

一、产品简介。

本产品包括慢病毒包装质粒（Lenti-Mix）、阳性对照质粒（lenti-GFP）、质粒 DNA 转染试剂（Omifection）和病毒感染增强试剂（polybrene），其中包装质粒能够与已经构建的慢病毒骨架质粒联合，生产高滴度的慢病毒。

二、运输和存储条件。

1. 本产品低温运输，各组份依据保存条件分开保存，自购买之日起，有效期为 12 个月。

2. Omifection 与 Polybrene 严禁冻存。

三、特点与优势。

1. 本试剂盒中的包装质粒能够与多家公司提供的慢病毒骨架质粒配合，生产高滴度的慢病毒。

2. 本试剂盒中的转染试剂 Oimifection，转染效率高，可以保证生产高滴度的慢病毒。

四、自备试剂与耗材。

1. OPTI-MEM 培养液 (Gibco)

2. 293T 细胞，是 293TN 细胞（System Biosciences），病毒生产量大。

五、 使用说明

1. 慢病毒包装。

1) 细胞培养。293T 细胞传代接种于细胞培养皿（Φ 100 mm），置于 37℃，5% CO2 培养箱中培养，24 h 后细胞密度达到 60%～80%。（细胞密度不宜过大，否则影响转染效率）

2) 转染。向 Lenti-Mix 中加入 1 mL OPTI-MEM 培养液，再加入 9 μg 慢病毒骨架质粒（目的蛋白过表达或 RNAi 质粒，或一管 GFP 对照质粒），混匀，加入 54 μL 转染试剂 Omifection，混合 10 次，室温静置 30 min，滴加入细胞培养液中，轻轻摇匀。

3) 换液。转染 6-12 h，更换成新鲜的细胞培养液，继续培养。

4) 慢病毒收集。转染 48 h，收集批含有慢病毒的细胞培养上清（暂时置于 4 ℃冰箱中保存），5) 293T 细胞中再加入 10 ml 新鲜的细胞培养液，24-48 h 后，收集第二批含有慢病毒的细胞培养上清（第二批细胞培养上清中的慢病毒滴度高于批）。

6) 离心。含有慢病毒的细胞培养上清转入离心机，3 000 rpm，4 ℃离心 5 min，弃沉淀，上清转入新的无菌离心管，即为含有慢病毒的细胞培养上清。

7) 含有慢病毒的细胞培养上清可在 4 ℃保存 1 个月，长期保存应置于-80 ℃，但冻融一次，病毒感染效果降低 30-50%。

2. 慢病毒感染

1) 目的细胞培养。目的细胞传代后接种到细胞培养皿（Φ 100 mm）中，24 h 后细胞密度达到30%-50%。

2) 慢病毒感染。弃培养液，加入 5 ml 新鲜培养液和 5 mL 含有慢病毒的细胞培养上清液，再加入病毒感染增强试剂（polybrene，1: 500-1:2000 稀释），轻摇，混匀。

3) 换液。病毒感染 12-24 h 后更换成新鲜的培养液，继续培养，若无细胞毒性，可以不换液。

4) 检测。慢病毒感染 72 h，荧光显微镜下观察 GFP 表达情况，或检测目的基因表达水平。

六、注意事项。

1. 请使用高纯度的慢病毒骨架质粒用于转染，质粒的 OD260/OD280 比值在 1.8～2.0 之间为宜。

2. 293T 细胞生长状态对于病毒包装至关重要，因此需要保证良好的细胞生长状态，一般使用代数较低（20 代以内）的 293T（N）细胞进行慢病毒包装。

3. 293T 细胞的密度应该控制在 60-80%之间，密度过低，病毒产量较低，密度过高，则转染效率降低，也会导致慢病毒滴度的降低。

4. 本试剂盒提供的转染试剂（Omifection）与病毒感染增强试剂（polybrene）严禁冻存。

5. 为了增强慢病毒感染效果，可以使用本公司的慢病毒感染增强试剂盒（Cat：OmL-04），其感染增强效果比对 Polybrene 可以提高 4-8 倍。