萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒

一、产品简介。

本产品的检测试剂中含有 Luciferin，在萤火虫萤光素酶（Luciferase）的作用下被氧化成Oxyluciferin，并发出生物萤光。可以通过检测生物萤光的强度，分析萤火虫萤光素酶的活性。为了检测目的基因的转录水平变化，可以将目的基因的转录调控元件或 5’端的启动子区域的 DNA 序列克隆到萤火虫萤光素酶基因的上游（5’端），也可以把目的基因的 3’-UTR 区域的 DNA 序列添加到萤光素酶基因的下游，构建报告基因质粒，转染细胞，检测萤光素酶的活性，确定目的基因的表达变化，完成报告基因检测分析。

二、运输与存储条件。

本产品低温运输，并依据各组份保存条件分开保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 本产品灵敏度高于市售同类试剂，可以更有效的检测基因转录水平变化。

2. 本试剂盒操作简单，能够快速完成萤火虫萤光素酶活性检测。

四、使用说明。

1. 以 6 孔细胞培养板培养的贴壁细胞为处理对象，实验步骤如下：

2. 细胞转染。细胞转染实验请参考本公司转染试剂（Omifection，Cat：Omc-01）说明书中的实验步骤，将编码萤火虫萤光素酶基因的质粒转入 6 孔板的细胞中，2 μg/孔。

3. 细胞裂解液配制。将 5×细胞裂解液与 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×细胞裂解液。现用现配，剩余的细胞裂解液可在 4℃保存一周。

4. 细胞裂解。转染 48 h，弃培养液，预冷的 PBS 洗涤细胞 1 次，加入 1 ml 细胞裂解液（1×），置于 4 ℃冰箱中的摇床上，摇晃 15-30 min，裂解细胞。裂解液转入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃离心 5 min，上清转移至新的 EP 管中，作为待测样品。加入细胞裂解液后也可直接用细胞刮刀刮下细胞，转移至 EP 管中，用移液器混匀，12,000×g，4 ℃离心 5 min，上清转移至新的 EP管中，作为待测样品。

5. 活性检测。打开检测仪器，设置测定参数，一般延迟时间（整合时间）为 2 sec，测定时间为 10-20 sec。吸取 100 μl 萤火虫萤光素酶检测试剂，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待测样品（细胞裂解液），混匀，仪器检测。

五、注意事项

1. 由于温度对酶促反应有影响，样品和试剂应达到室温后再进行测定活性测定。

2. 检测试剂不可反复冻融，可分装成100 μl/管，置于-80 ℃长期保存。

3. 手动测定时，样品加入底物时的间隔时间和混合次数尽量一致，减少操作误差。