血液RNA保护与提取试剂盒

血液 RNA 保护与提取试剂盒

一、产品简介。

血液 RNA 保护与提取试剂是集血液 RNA 保护与提取为一体的试剂，与血液混合后，可以有效抑制血液中的 RNA 降解，且混合物可直接用于 RNA 提取。

二、运输与存储条件。

本产品低温运输，-20 ℃避光保存，有效期 12 个月，使用时置于 4 ℃存放，1 个月内用完。

三、特点与优势。

1. 本试剂与血液混合后，可有效抑制血液中的 RNA 酶活性，保护 RNA 免于降解。

2. 本试剂与血液混合后可直接用于 RNA 提取。

四、自备试剂。

氯仿（三氯甲烷），异丙醇，75%乙醇，RNase-free EP 管和枪尖。

五、使用说明。

1. 血液处理。血液采入抗凝管后立即颠倒混匀，防止凝结，并尽快转入装有 RNA 保护与提取试剂的试管中，震荡（Vortex）混匀。抗凝血的体积控制在 3 mL 左右为宜，体积不够时，可以用RNase-free ddH2O 补齐（不可用 PBS）。该混合液可室温保存 3 天， 4 ℃保存 1 周，或 -20 ℃长期保存，RNA 不会降解。

2. 离心。12,000×g，4 ℃离心 5 min，管底出现少许沉淀，上清转移至新的 15 mL 离心管。

3. 加入 1.8 mL 氯仿，震荡（Vortex）混匀 30 sec。

4. 12,000×g，4 ℃离心 10 min，样品分为三层，RNA 集中在上层无色水相中，DNA 集中在中间层，蛋白集中在下层的淡紫红液相中。

5. 上层水相转移到 2 支 15 mL 离心管中，每管加入等体积的异丙醇，震荡（vortex）混匀。

6. 12,000×g，4 ℃离心 10 min，可在管壁或管底看到白色的 RNA 沉淀，弃上清。

7. 加入 1 mL 75%的乙醇，震荡（vortex）洗涤 RNA 15 sec。

8. 12,000×g，4 ℃离心 5 min，RNA 沉淀到管底，弃洗涤液。

9. 瞬时高速离心，使管壁上的液体离心到管底，利用微量移液器轻轻吸取全部液体。

10. 加入 100-300 μL RNA 溶解液或 RNase-free ddH2O，溶解 RNA。

11. 测定 RNA 的浓度与纯度，用于反转录或其它实验，或保存于-80 ℃冰箱。

六、注意事项。

1. RNA 保存和提取试剂与血液混合后，若血液较少，可以用 RNase-free ddH2O 补足体积到 12 mL，但严禁使用 PBS 补足体积，否则导致 RNA 提取失败。

2. 血液中 RNA 酶含量较高，RNA 容易降解，因此，血液采入抗凝管后，应在 10 min 内转入 RNA保护与提取试剂中，方可有效保护 RNA 免于降解。

3. 转移上层水相时不要吸入中间层或下层液体，否则导致 DNA 及蛋白污染，降低 RNA 纯度。

4. RNA 保护与提取试剂具有腐蚀性与刺激性，使用时请穿好实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜，以避免 RNA 保护与提取试剂飞溅导致的皮肤、眼睛或者呼吸道等部位的化学灼伤。如果不慎接触了皮肤或者眼睛，请立即用大量水冲洗，必要时去医院护理。