RNA提取试剂盒(室温型）

RNA提取试剂盒(室温型）

一、产品简介。

本产品是一款不依赖冷冻离心机，可在室温条件下快速提取 RNA 的试剂盒。

二、运输与存储条件。

本产品常温运输与保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 可以室温条件下提取 RNA。

2. gDNA 去除柱可以有效去除基因组 DNA，得到高纯度的 RNA。

3. 本试剂盒无需酚/ 氯仿抽提，显著提高实验操作的安全性。

四、自备试剂与耗材。

无水乙醇，RNase-free EP 管（1.5 mL）和枪尖。

五、使用说明。

1. 试剂配制：

a) Wash Buffer C（去蛋白液）配制。在去蛋白液中加入 21 mL 无水乙醇，混匀。

b) Wash Buffer D（漂洗液）配制。在漂洗液中加入 24 mL 无水乙醇，混匀。

2. 细胞裂解。

1) 细胞裂解。

a) 贴壁细胞裂解。PBS 洗涤 6 孔板中的贴壁细胞，加入 0.5 mL 裂解液，吹打混匀，转移到 1.5 mL EP 管中，室温静置 3-5 min，保证细胞充分裂解。

b) 悬浮细胞裂解。离心法收集悬浮细胞，按照 5-10×106 个细胞加 0.5 mL 裂解液的比例加入裂解液，混匀，室温静置 3-5 min，保证细胞充分裂解。

2) 组织裂解。称取 10-20 mg 组织，置于 EP 管中，加入 0.5 mL 裂解液，利用手持式电动匀浆仪对组织块进行匀浆处理。或利用液氮冷冻组织块，经研钵研磨成粉末后转入 EP 管中，再加入 0.5 mL 的裂解液，用移液器轻轻混匀，室温静置 3-5 min，保证组织充分裂解。

3. 沉淀。细胞裂解液或组织裂解液用离心速度（12,000 × g）离心 5 min，上清转移至新的离心管，弃沉淀。

4. 将上清液加入 gDNA 去除柱，12,000×g，离心 30 sec，弃 gDNA 去除柱，保留滤液（含有 RNA）。

5. 加入与滤液等体积的无水乙醇，混匀，转入 RNA 纯化柱中，12,000 × g，离心 30 sec，弃滤液。

6. 剩余上清加入对应的 RNA 纯化柱，12,000 × g，离心 30 sec，弃滤液。

7. 向 RNA 纯化柱中加入 0.5 mL Wash Buffer C（去蛋白液），12,000 × g，离心 30 sec，弃滤液。

8. 向 RNA 纯化柱中加入 0.5 mL Wash Buffer D（漂洗液），12,000 × g，离心 2 min，弃滤液。

9. 将 RNA 纯化柱插入新的 RNase-free EP 管中，向柱中央滴加 100 μl Elution Buffer R（洗脱液）或RNase-free ddH2O，室温静置 2 min，

10. 12,000× g，离心 2 min，得到 RNA 溶液。

11. 立即用于反转录等实验，或保存于-80 ℃冰箱。

六、注意事项。

1. 本产品可在常温条件下提取 RNA，也可在低温条件下提取 RNA，但裂解步骤需在常温进行，因为裂解液低温时浑浊，影响实验效果。

2. 为了您的健康，请穿好实验服，并佩戴乳胶手套和安全眼镜。

注意：

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。