RNA提取试剂（TRIZOL型）

RNA提取试剂

(TRIZOL型)

一、运输与存储条件

   本产品常温运输，避光保存，有效期2年。

二、注意事项（请使用试剂盒前阅读此注意事项）

1.     蛋白、多糖或脂类含量较高的组织，裂解后可能存在沉淀或油状漂浮物，12,000×g，4 ℃离心10 min除去沉淀或其它杂物，上清转入新的离心管，再加入氯仿，进行后续实验。

2.     转移上层水相时若吸入中间层或下层液体，则导致DNA或蛋白污染，降低RNA纯度。

3.     若细胞数量较少（少于1×10⁵）或组织块较小（小于10 mg）时，RNA总量较少，可以使用本公司的微量RNA提取试剂盒（磁珠型，Cat：Omn-12）来提取。

4.     检测RNA吸光度时，260 nm、320 nm、230 nm和280 nm处吸光度值的分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白质等物质的吸光度值。OD260/OD280（R）体现了RNA的纯度，质量较好的RNA的R值应该在1.8~2.2之间。当R<1.8时，说明RNA溶液中的蛋白质污染比较明显。当R>2.2时，说明RNA已经被降解成了单核苷酸。

5.     利用琼脂糖凝胶检测RNA时，高质量的总RNA具有以下特征：电泳条带清晰，无拖尾、模糊现象；28 S亮度明显大于18S，比值接近或超过2:1；5 S条带亮度较弱或不可见。

6.     本试剂具有腐蚀性与刺激性，使用时请穿好实验服、佩戴乳胶手套和安全眼镜，避免试剂飞溅导致的皮肤、眼睛或者呼吸道等部位的化学灼伤。如果不慎接触皮肤或者眼睛，请立即用大量水冲洗，必要时去医院护理。

三、产品简介

RNA提取试剂（TRIZOL型）是一款基于TRIZOL配方和原理设计的RNA提取试剂，通过酚/氯仿抽提，可以高效的提取细胞、细菌、血液、动物组织和植物组织中的RNA，用于反转录和Northern blot等生物学实验。

四、特点与优势

1.     适用于多种（细胞、细菌、血液、动物组织和植物组织等）类型生物样品的RNA提取。

2.     可以快速获得高纯度的RNA。

五、自备试剂与耗材

   氯仿（三氯甲烷），75%乙醇，RNase-free EP管（1.5 mL）和枪尖。

六、使用说明

1.       细胞或组织裂解。

1)        细胞裂解。

a)       贴壁细胞裂解。6孔板培养细胞，弃培养液，预冷的PBS洗涤一次，加入1 mL RNA提取试剂（TRIZOL型），吹打混匀，转移到1.5 mL EP管中，室温静置3-5 min。

b)      悬浮细胞裂解。离心收集悬浮细胞，按照5-10×10⁶个细胞需要1 mL RNA提取试剂（TRIZOL）的比例加入试剂，混匀，室温静置3-5 min。

2)        组织裂解。称取10-50 mg组织，置于EP管中，加入1 mL RNA提取试剂（TRIZOL型），利用手持式电动匀浆仪进行匀浆处理，室温静置3-5 min。

2.       加入200 μL氯仿，剧烈震荡（Vortex）15 sec。

3.       12,000 ×g，4 ℃，离心10 min，样品分为三层，RNA集中在上层的无色水相中，DNA集中在中间层，而蛋白集中在下层的淡紫红色液相中。

4.       转移上层水相至新的EP管，加入等体积的异丙醇，颠倒混匀10-20次。

5.       12,000×g，4 ℃离心10 min，可以在管底或管壁上看到白色凝胶状的RNA沉淀，弃上清液。

6.       加入1 mL 75%的乙醇，轻微震荡15 sec，洗涤RNA沉淀。

7.       12,000×g，4 ℃离心5 min，RNA沉淀到管底，弃上清。

8.       瞬时高速离心，使管壁上的液体离心到管底，利用微量移液器吸尽液体。

9.       加入100-200 μL RNA溶解液或RNase-free ddH₂O，溶解RNA。

10.   测定RNA浓度与纯度，用于反转录或其它实验，或保存于-80℃冰箱。

七、常见问题与分析