"NCI-H650:人非小细胞肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长:贴壁
有一些细胞是数量多一点比较HAO生长,生长状态也比较HAO。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较HAO,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较HAO。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不HAO的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞,如果细胞形态不HAO,(或者细胞形态不清晰,表面似有异物等)可以在传代的时候进行如下操作:首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。(巨噬细胞建议只吹打,不消化)其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想,可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得HAO的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
MDA.MB.435细胞类似产品::B-cell with DC Morphology细胞、PCI-4.2细胞、Liver-02细胞
GTL16细胞类似产品::NCI-H1184细胞、H-1341细胞、MBVP细胞
C1498细胞类似产品::EB-3细胞、BJA-B1细胞、Mono Mac 1细胞
T-47D细胞类似产品::149 PT细胞、HT115细胞、BCaP-37细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞背景资料:详见相关文献介绍
NCI-H650:人非小细胞肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞形态:上皮细胞样
PC3M细胞类似产品::BMSC/hBMSCs细胞、KM12SM细胞、PNT-1A细胞
P3 (Jiyoye)细胞类似产品::hMSC-BM细胞、CCD-1095Sk细胞、B-95-8细胞
ML-2细胞类似产品::CAMA细胞、H2452细胞、NCIH508细胞
细胞传代培养的胰酶消化法:传代培养:是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移,接种到另一培养瓶的培养。传代细胞,可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代,部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤:①入无菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒双手;②倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液37℃下预热;③超净台台面应整洁,用75%酒精棉球擦拭清洁;④打开超净工作台的紫外灯照射台面20min左右,关闭紫外灯,打开风机清洁空气除去臭氧;⑤点燃酒精灯;取出无菌试管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内;⑥将培养用液瓶口用75%酒精消毒,过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上;⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去残留的就培养基,或用少量胰酶涮洗一下;⑧每个大培养瓶加入1ml胰酶,小培养瓶用量酌减,盖HAO瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶,使细胞脱离胰酶,然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中;⑨加入少量的含血清的新鲜培养基,反复吹打消化HAO的细胞使其脱壁并分散,再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成细胞悬液,然后分装到新培养瓶中。盖HAO瓶盖,适度拧紧后稍回转,以利于CO2的进入,将培养瓶放回CO2培养箱;⑩对悬浮培养细胞,步骤7-9不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清,加入新鲜培养基,然后分装到各瓶中。
细胞传代方法:1:3-1:6传代;
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
NCI-H650:人非小细胞肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长特性:悬浮生长
细胞培养中常用设施及设备:实验室设计:细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。常用设施及设备:1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式、直流式和外流式三大类。2)无菌操作间:一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒HAO的无菌物品等。3)操作间:普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物。4)洗刷消毒间:烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。5)分析室:显微镜、计算机及打印机等。
H-1417细胞类似产品::CFPAC1细胞、NCIH1581细胞、KOSC-2 cl3-43细胞
COLO829细胞类似产品::HS-695T细胞、L-02细胞、H341细胞
WRL 68细胞类似产品::RAT2细胞、LIXC002细胞、U 138 MG细胞
Hs683细胞类似产品::293-F细胞、LK 2细胞、Line 697细胞
HGBEC细胞类似产品::BEAS-2B细胞、MGH-U1 (EJ)细胞、LNCaP C4-2B细胞
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HuT 78细胞类似产品::LS 174T细胞、SKMEL3细胞、ST细胞
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Mel624细胞类似产品::NCIH847细胞、CAL 148细胞、SK Mel 24细胞
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CNLMG-B5537SKIN细胞类似产品::UPCI:SCC90细胞、L 540细胞、SK-N-BE2细胞
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NCI-H650:人非小细胞肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
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D562细胞类似产品::MIA-PaCa-2细胞、HFT8810细胞、SHSY5Y细胞
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