"BT-483:人乳腺导管癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长:贴壁
冻存和复苏的原则:慢冻快融》当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升GAO,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶就大,大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序:采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时,1~2℃/min;当温度达-25℃以下时,5~10℃/min;当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中。2.简易程序:将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40min内降至液氮表面过夜,次晨投人液氮中。3.传统程序:冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。细胞冻存方法:1.预先配制冻存液》(1)8%DMSO+细胞生长液(92%血清)2.取对数生长期细胞,经胰酶消化后,加入适量冻存液,用吸管吹打制成细胞悬液(1×10(6)~5×10(6)细胞/ml)。3.加入1ml细胞于冻存管中,密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法:1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1分钟内全部融化(不要超过3分钟)。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养,24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液,以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
H-1092细胞类似产品::Hs 863.T细胞、MCF 10A细胞、H-1238细胞
HHL5细胞类似产品::NCI-H322细胞、HTori3细胞、DOK细胞
H187细胞类似产品::NCI-H748细胞、TE-7细胞、H2342细胞
TYK-nu细胞类似产品::SEG-1细胞、Mv 1 Lu (NBL-7)细胞、HTSMC细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞背景资料:详见相关文献介绍
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细胞形态:上皮细胞样
U 266细胞类似产品::SUDHL-4细胞、AML-EOL-1细胞、HCS-2/8细胞
Nb2-11细胞类似产品::NCI-H2444细胞、L-363细胞、MFE 280细胞
GS-9L细胞类似产品::BC-028细胞、Neukoplast细胞、OAW42细胞
细胞传代培养的胰酶消化法:传代培养:是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移,接种到另一培养瓶的培养。传代细胞,可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代,部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤:①入无菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒双手;②倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液37℃下预热;③超净台台面应整洁,用75%酒精棉球擦拭清洁;④打开超净工作台的紫外灯照射台面20min左右,关闭紫外灯,打开风机清洁空气除去臭氧;⑤点燃酒精灯;取出无菌试管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内;⑥将培养用液瓶口用75%酒精消毒,过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上;⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去残留的就培养基,或用少量胰酶涮洗一下;⑧每个大培养瓶加入1ml胰酶,小培养瓶用量酌减,盖HAO瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶,使细胞脱离胰酶,然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中;⑨加入少量的含血清的新鲜培养基,反复吹打消化HAO的细胞使其脱壁并分散,再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成细胞悬液,然后分装到新培养瓶中。盖HAO瓶盖,适度拧紧后稍回转,以利于CO2的进入,将培养瓶放回CO2培养箱;⑩对悬浮培养细胞,步骤7-9不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清,加入新鲜培养基,然后分装到各瓶中。
细胞传代方法:1:2传代,2—3天换液一次
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
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细胞生长特性:贴壁生长
细胞培养中常用设施及设备:实验室设计:细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。常用设施及设备:1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式、直流式和外流式三大类。2)无菌操作间:一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒HAO的无菌物品等。3)操作间:普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物。4)洗刷消毒间:烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。5)分析室:显微镜、计算机及打印机等。
LNCaP-Clone-FGC细胞类似产品::H1954细胞、3T6 Swiss Albino细胞、Tj-905细胞
Tu 177细胞类似产品::KP-4细胞、NCI-SNU-1细胞、H-82细胞
C1498细胞类似产品::EB-3细胞、BJA-B1细胞、Mono Mac 1细胞
Ramos-RA1细胞类似产品::H-740细胞、H2052_MM细胞、870细胞
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SK Hep1细胞类似产品::D-324MED细胞、Murine Lung Epithelial-12细胞、CCD841CoTr细胞
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Panc 02细胞类似产品::T47-D细胞、Hs675T细胞、Pan02细胞
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SBC5细胞类似产品::NCI-SNU-C2A细胞、KLE细胞、RD细胞
BT-483:人乳腺导管癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
MC38细胞类似产品::QG56细胞、H-1238细胞、OCM1A细胞
HCC1395细胞类似产品::COLO-829细胞、3T6细胞、Human Fetal Thymocyte-8810细胞
PL 5细胞类似产品::U 266细胞、HT144-mel细胞、D10.G4.1细胞
EB-2细胞类似产品::Rainbow Trout Embryo细胞、U251n细胞、CHO-S细胞
WEHI 164 TC细胞类似产品::Hs683T细胞、OVCA 432细胞、MARC 145细胞
HEL-92.1.7细胞类似产品::H-35 Reuber细胞、SW620细胞、H-1836细胞
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