"GBC-SD:人胆囊癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长:贴壁
有一些细胞是数量多一点比较HAO生长,生长状态也比较HAO。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较HAO,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较HAO。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不HAO的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞,如果细胞形态不HAO,(或者细胞形态不清晰,表面似有异物等)可以在传代的时候进行如下操作:首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。(巨噬细胞建议只吹打,不消化)其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想,可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得HAO的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
LS411N细胞类似产品::H-510细胞、GM2219C细胞、MC-CAR细胞
Merwin Plasma Cell tumor-11细胞类似产品::PAI细胞、SUM 190细胞、MCF12A细胞
NTERA-2cl.D1细胞类似产品::DHBE细胞、MDA PCa 2b细胞、KCL22S细胞
AG 9细胞类似产品::Ramos-RA1细胞、IAR20细胞、NCIH345细胞
[细胞产品包装]鲜活细胞:T25培养瓶(一瓶)或冻存细胞:1ml冻存管(两支)
细胞背景资料:GBC-SD 细胞株是王展明等2000年从一位61岁的男性低分化胆囊癌患者中建立的。 细胞的形状有多边形、纺锤形和正方形。 分泌CEA和CA19-9。倍增时间大约为21.4小时。 可移植到裸鼠。 生成的肿瘤与原发肿瘤相似。
GBC-SD:人胆囊癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞形态:上皮细胞样
HCC0038细胞类似产品::U-373MG细胞、Hs688(A)T细胞、J-774细胞
SMA 560细胞类似产品::HPAF-II细胞、H2444细胞、I90细胞
HCC827细胞类似产品::CAL 148细胞、CHO-S细胞、NTERA-2/D1细胞
细胞培养方面注意的几点:无菌意识要强:实验进行前,超净台以紫外灯照射30分钟灭菌,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置,其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以70%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基:不同的细胞可能培养基不同,甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞,有文献就选用neurobase培养基,而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而这种培养基中含有抗氧化剂成分,此时,我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:4℃冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后,将血清放入,待温度升GAO到56℃后计时,一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须,一般不要作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
细胞传代方法:1:2传代
细胞来源说明:来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库
GBC-SD:人胆囊癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
细胞生长特性:贴壁生长
贴壁细胞传代:去掉原T25培养瓶里面的培养基,T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次;弃PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化细胞,显微镜下观察,待细胞变圆,细胞间隙明显,部分细胞刚开始脱离瓶壁,加4 ml左右完全培养液混匀终止消化,将细胞小心吹打下来,1000rpm/min室温离心5min;弃上清,细胞沉淀用完全培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶补足培养基至5-6ml,37℃、5%CO2孵箱培养。悬浮细胞传代:一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,将细胞悬液移入离心管中,1000rpm/min 室温离心5min。弃上清,细胞沉淀用完全培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培养液至4-5ml,37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长,此时细胞生长状态良HAO,当补液时,需避免反复吹打。
GM2131细胞类似产品::RT-112细胞、P3-X63-Ag8-6-5-3细胞、PIEC细胞
Y3-Ag 1.2.3细胞类似产品::0V-1063细胞、DU_145细胞、ECC-10细胞
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TJ905细胞类似产品::CCC-HEL-1细胞、SNU-407细胞、Pa017C细胞
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RL95细胞类似产品::MMVECs细胞、P30/0HK细胞、OCI/AML-2细胞
Human Epithelioma-2细胞类似产品::HCC-1171细胞、SNK6细胞、TEV-1细胞
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NCIH2170细胞类似产品::Karpas-422细胞、Roswell Park Memorial Institute 8226细胞、OCILY7细胞
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MKN 7细胞类似产品::MCAEC细胞、COR-L279细胞、JEG-3细胞
GBC-SD:人胆囊癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)
5637细胞类似产品::2T细胞、H292细胞、SUP T1细胞
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H341细胞类似产品::MTEC1细胞、Radiation Effects Research Foundation-Lung Cancer-MS细胞、MDAMB435细胞
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HS-766T细胞类似产品::SW-1353细胞、NCI-H2085细胞、C32r细胞
TB1 Lu细胞类似产品::SK_HEP1细胞、P3HR-1细胞、LA-N-1细胞
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McArdle RH-7777细胞类似产品::WB F344细胞、786.O细胞、OVCAR-420细胞
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SJSA1细胞类似产品::L2细胞、CL34细胞、SHG44细胞
DanG细胞类似产品::207细胞、TGW细胞、T2(174 x CEM.T2)细胞
Rat-1细胞类似产品::GM00215A细胞、MDA231细胞、KU-812-F细胞
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NHRF细胞类似产品::D-341 Med细胞、MB 157细胞、IOSE 29细胞
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HTh74细胞类似产品::NCI-H1568细胞、KG1A细胞、KY-50细胞
KU 19-19细胞类似产品::Bovine Turbinate细胞、NCIH2141细胞、Caco-2BBe细胞
Tu 212细胞类似产品::H-187细胞、769P细胞、ssMCF7细胞
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