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血清总铁结合力(Total Iron Binding Capacity，TIBC)试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力，其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。

测定原理：

Fe²⁺与菲洛嗪反应形成紫红色化合物，在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下，血清转铁蛋白可以与Fe³⁺结合，剩余未结合的Fe³⁺可以被还原成Fe²⁺，此时吸光度A1与未结合Fe³⁺数量正相关；酸化后，转铁蛋白结合的Fe³⁺释放，并且进一步被还原 Fe²⁺，此时吸光度A2与总Fe³⁺数量正相关。A2减A1与TIBC浓度呈正比。

自备实验用品及仪器：

天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。（临用前根据用量将A液和B液按1:1混合）

试剂四：液体 7mL×1 瓶，4℃保存。

测定操作表：

1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至562nm。

2、操作表

血清总铁结合力计算公式：

总铁结合能力定义：37℃条件下，每升血清结合Fe³⁺的μmol数。

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.5478x+0.0281，R²=0.9981

总铁结合能力TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.5478×V反总÷V样=20.99×（ΔA-0.0281）

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.2739x+0.0281，R²=0.9981

总铁结合能力TIBC（μmol/L）=（ΔA-0.0281）÷0.2739×V反总÷V样=41.98×（ΔA-0.0281）

V 反总：反应总体积，0.46mL；V 样：反应中样本体积，0.04mL

注意事项：

1. 吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2. 试剂二、试剂三有一定的毒性，操作时请做好防护措施。

3. 检测限为4.78μmol/L。