上海臻科生物科技有限公司

铁含量（亚铁嗪比色法）检测试剂盒说明书

                 （货号：ZK-1212F  分光法 48样）

一、产品简介：

在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，该有色物质在562nm处有特征吸收峰，进而计算得出铁含量。适用于检测组织、血清等样品中的铁含量。

二、试剂盒组分与配制：

三、所需仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、可调式移液器、离心机、蒸馏水。

四、铁含量检测：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、 样本制备：

① 组织样本：

取约0.1g组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心5min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL

提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液(mL)为500~1000：1的比例进行提取。

③ 液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。

2、上机检测：

①可见分光光度计预热30min，设定波长到562nm，蒸馏水调零。

②所有试剂解冻至室温，在EP管中依次加入：

【注】：若A测定管大于0.8，可用蒸馏水对样本上清液进行稀释，稀释倍数D代入计算公式。

五、结果计算：     

1、按照组织质量计算：

铁含量(μg/g)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V1÷V×W)×D

=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W×D

铁含量(nmol/g)= (C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V1÷V×W)×10³÷Mr×D

=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W×D

2、按细胞数量计算：

铁含量(μg/10⁴ cell)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V1÷V×细胞数量)×D

=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷细胞数量×D

铁含量(nmol/10⁴ cell)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(V1÷V×细胞

数量)×10³÷Mr×D 

=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷细胞数量×D

3、按照液体体积计算：

铁含量(μg/mL)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷V1×D

=2×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×D

铁含量(μmol/L)=(C标准×V1)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷V1×10³÷Mr×D

=35.81×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)×D

C标准---铁标品浓度，2μg/mL；    V1---加入样本体积，0.24mL；

V---提取液体积，1mL；            W---样本取样质量，g；

细胞数量---细胞数量，若取500万则把500代入公式计算；

D---稀释倍数，未稀释即为1；      Mr---铁分子量，55.847。