武汉艾美捷科技有限公司

产品概述

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的RhoA / Rac1 / Cdc42 G-LISA GTPase Activation Assay Bundle 3 Kits（Cat. #BK135）是一款专为同时检测细胞和组织裂解液中三种关键Rho家族GTP酶——RhoA、Rac1和Cdc42激活状态（GTP结合态）而设计的组合型比色检测试剂盒。该产品将三个独立的G-LISA检测试剂盒整合为一套组合包装，每个GTP酶各提供24次检测用量，是信号通路研究的高效工具。

核心性能参数

参数 | 指标

检测靶标 | RhoA、Rac1、Cdc42（GTP结合激活态）

检测类型 | 定量比色法

检测通量 | 每种GTP酶各24次（共72次）

样本需求 | 每孔10-50 µg细胞或组织裂解物

检测时长 | 约3小时

适用样本 | 细胞裂解液、组织裂解液 |

关键特性

1. 三重靶标组合检测

一次实验可并行检测RhoA、Rac1和Cdc42三种GTP酶的激活水平，便于系统比较不同GTPase信号通路的调控变化，适用于多通路联合分析。

2. 样本需求量低

每孔仅需10-50 µg裂解物，尤其适合样本量有限的实验场景，如原代细胞培养、稀有细胞亚群或微量组织样本。

3. 定量检测能力

提供比色法定量读数，结果客观、可重复，便于不同实验间进行数据比较和统计分析。

4. 操作简便高效

全过程约3小时即可完成从样本上样到信号检测的全部流程，显著缩短实验周期。

5. 灵活性高

采用可拆卸酶标板设计（strip-wells），可根据实验需要灵活选择单孔或多次检测，避免试剂浪费。

试剂盒组分

组分类别 | 具体内容

捕获板 | 分别包被GTP-RhoA、GTP-Rac1、GTP-Cdc42结合蛋白的24孔板各1块

一抗 | 抗Rac1、抗Cdc42、抗RhoA抗体各1支

阳性对照 | 组成性激活型RhoA、Rac1、Cdc42对照蛋白各1支

二抗 | HRP标记的检测抗体

缓冲体系 | 裂解液、结合缓冲液、洗涤缓冲液、抗原呈递缓冲液、抗体稀释液

检测试剂 | HRP比色检测底物A液和B液、终止液

蛋白定量 | Precision Red先进蛋白检测试剂

其他 | 蛋白酶抑制剂混合物、板架

生物学活性验证

BK135试剂盒的生物学活性已在各组分G-LISA单试剂盒（BK128、BK127、BK124）中得到充分验证，确保每批次产品均具备可靠的特异性和灵敏度。组合试剂盒保留了与单个试剂盒同等的检测性能，满足定量检测标准要求。

操作流程

样本制备： 使用配套裂解液（含蛋白酶抑制剂）裂解细胞或组织，裂解后建议液氮速冻保存以维持GTP结合态蛋白的稳定性。

GTPase捕获： 将裂解物加入各特异性GTP结合蛋白包被孔中，GTP结合的激活态GTPase被选择性地捕获于孔底。

检测： 依次加入特异性一抗、HRP标记二抗进行检测，通过比色反应（OD 490 nm）定量测定各GTPase的激活水平。

数据校正： 使用Precision Red蛋白检测试剂对总蛋白浓度进行定量，用于激活水平的归一化校正。

所需配套设备

设备/材料 | 要求

酶标板振荡器 | 至少200 rpm，需具备4°C和室温两种条件

多通道移液器 | 用于快速加样

酶标仪 | 配备490 nm滤光片

硫酸 | 浓缩硫酸1 ml

细胞刮刀 | 用于收获贴壁细胞

液氮 | 用于裂解物速冻

应用方向

信号通路比较研究：在相同实验条件下平行比较RhoA、Rac1、Cdc42三种GTPase的激活水平

药物筛选与机制研究：评估不同处理因素对Rho家族GTPase活性的调节作用

疾病相关信号转导分析：检测病理状态下三种GTPase活性的差异性变化

样本量受限场景：原代细胞、稀有细胞亚群或微量活检样本的功能分析

储存与操作建议

试剂盒各组分请按说明书要求分别储存。裂解液和蛋白酶抑制剂混合物建议-20°C保存；HRP检测试剂和终止液可在2-8°C避光保存；配制好的洗涤缓冲液可在2-8°C保存。所有试剂使用前应平衡至室温。废弃试剂处置须遵守当地相关法规。

文献参考

1. Lerm M., et al. 1999. Deamidation of Cdc42 and Rac by Escherichia coli cytotoxicnecrotizing factor 1: activation of c-Jun N-terminal kinase in HeLa cells. Infection andimmu-nity. 67, 496-503