武汉艾美捷科技有限公司

一、研究背景

肌动蛋白是真核细胞中含量最丰富、进化上高度保守的蛋白质之一，由375个氨基酸组成，在SDS-PAGE体系中分子量约为43 kDa。细胞内的肌动蛋白以两种动态可相互转化的形式存在：球状单体形式（G-肌动蛋白）和纤维状聚合形式（F-肌动蛋白）。F-肌动蛋白构成直径约7–10 nm的微丝网络，是细胞骨架的核心结构组分。

在非肌肉细胞中，肌动蛋白细胞骨架呈现高度动态特性。G-肌动蛋白与F-肌动蛋白之间的比例可迅速变化，这一平衡直接受超过100种肌动蛋白结合蛋白（ABPs）的调控，而后者又受到大量间接调控因子的精密控制。肌动蛋白细胞骨架参与众多关键细胞生命活动，包括：细胞形态的维持与调节、细胞运动、胞内信号转导与通讯、胞内物质运输，以及胞外信号向胞内的传递等。因此，深入理解直接和间接调控肌动蛋白细胞骨架的分子机制是当前细胞生物学的重要研究方向，而定量测定细胞内G-肌动蛋白/F-肌动蛋白比值则成为揭示这些调控机制的有效途径之一。

二、产品概述

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的G-肌动蛋白/F-肌动蛋白体内检测试剂盒（货号：BK037）提供了一套完整的生化分析方案，用于定量测定细胞或组织样本中G-肌动蛋白与F-肌动蛋白的比例。该试剂盒基于选择性增溶与超速离心分离原理，通过SDS-PAGE结合Western blot方法对两种形式的肌动蛋白进行分离和定量，为研究肌动蛋白动态调控提供了可靠的技术工具。

三、核心应用场景

本试剂盒主要适用于以下研究领域：

信号转导与肌动蛋白动态变化的关系研究：分析不同信号刺激下G:F肌动蛋白比例的变化规律

肌动蛋白结合蛋白（ABPs）功能的体内评估：研究ABPs过表达或敲除对肌动蛋白聚合状态的影响

发育等形态发生过程中的肌动蛋白动态追踪：监测G:F肌动蛋白比例在细胞形态改变过程中的演变

药物化合物对肌动蛋白细胞骨架影响的评估：筛选和表征影响肌动蛋白聚合状态的药理学活性分子

四、检测原理

本试剂盒采用去污剂为基础的裂解缓冲体系，该缓冲液可同时稳定并维持细胞中G-肌动蛋白和F-肌动蛋白的原始状态。具体而言，裂解缓冲液能够有效溶解G-肌动蛋白使其进入可溶相，而F-肌动蛋白在该缓冲体系中保持不溶状态。通过超速离心步骤（100,000 × g），F-肌动蛋白沉淀至管底，而G-肌动蛋白则保留于上清液中。分别收集上清液和沉淀样品，经SDS-PAGE分离后，通过Western blot方法使用抗肌动蛋白单克隆抗体对两种形式的肌动蛋白进行定量检测。通过比较上清与沉淀中肌动蛋白的信号强度，即可计算获得G:F肌动蛋白比值。

五、试剂盒组分与材料清单

提供的试剂与耗材（足够100次×1 ml裂解反应）：

裂解与F-肌动蛋白稳定缓冲液

蛋白酶抑制剂混合物

ATP

F-肌动蛋白解聚缓冲液

F-肌动蛋白增强溶液

G-肌动蛋白标准品

抗肌动蛋白单克隆抗体

SDS样品缓冲液

DMSO

需自备的设备与材料：

温控超速离心机（可达到100,000 × g，适配100 μl样品体积；试剂盒可适配更大体积，但检测次数会相应减少）

小型匀浆器（低毫升数规格）或25G针头及注射器

SDS-PAGE及Western blot设备

抗小鼠二抗

六、关键性能参数

参数 | 指标

检测类型 | 半定量（G:F比值）

分离方式 | 超速离心（100,000 × g）

检测方法 | SDS-PAGE + Western blot

反应通量 | 100次×1 ml裂解反应

总耗时 | 约8小时（通常分两日完成）

七、产品优势总结

BK037 G-肌动蛋白/F-肌动蛋白体内检测试剂盒提供了一套标准化、完整的G:F肌动蛋白比值测定方案，涵盖了从细胞裂解、F-actin/G-actin分离到Western blot定量检测的全流程。试剂盒内含抗肌动蛋白单克隆抗体和G-肌动蛋白标准品，简化了实验人员自行摸索抗体和定量标准的环节。该试剂盒适用于多种细胞类型和组织样本，为肌动蛋白细胞骨架动态调控研究提供了可靠、可重复的定量工具，可广泛应用于细胞信号转导、发育生物学和药物筛选等研究领域。

文献参考

1) Milligan R.A. et al. 1990. Molecular structure of F-actin and location of surfacebinding sites. Nature 348, 217-221.

2) Dos Remedios C.G. et al. 2003. Actin binding proteins: regulation of cytoskeletalmicrofilaments. Physiol. Rev. 83, 433-473.

3) Phillips D.R. et al. 1980. Identification of membrane proteins mediating theinteraction of human platelets. J. Cell Biol. 86, 77-86.

4) Kim H.R. et al. 2008. Cytoskeletal remodeling in differentiated vascular smoothmuscle is actin isoform dependent and stimulus dependent. Am. J. Physiol. CellPhysiol. 295, C768-C778.